大家好!小编今天给大家解答一下有关elisa抗体做wb,以及分享几个elisa法检测抗体的原理对应的知识点,希望对各位有所帮助,不要忘了收藏本站喔。
ELISA的抗体可以用来做western和免疫组化吗
1、ELISA的抗体可以用来做western,不一定能够做免疫组化,因为抗体的滴度不同。
2、经elisa检测抗体后是否就能保证可用于后续的wb、免疫组化、流式细胞仪检测,因为还具有活性。直接ELISA 将抗原固定于ELISA板上,然后用酶标抗体直检测抗原。
3、虽然都是免疫学的东东,但基本是没戏了。什么试剂都不能用。ELISA试剂盒里面的试剂,无论是标准品抗原还是抗体,浓度都很低。做WESTERN根本不够。你可以看一看别家抗体做WESTERN与做 ELISA时的稀释倍数。
4、用于western的抗体和用于ELISA的抗体,一 般来说用于western的抗体识别的是氨基酸序列特异性;而可用于ELISA的抗体则要看抗原种类,有些是识别氨基酸序列特异性,有些是识别构像特异性。所以一-般根据抗体说明书来确定。
5、由于免疫组化的蛋白一般没有变性保留着二级或三级结构,抗体较难结合,所以抗体效价需要较高,而western的蛋白都是变性的,蛋白决定簇基本暴露,所以不需要很高效价的抗体。
6、也就是线性表位,那么这种抗体可同时用于免疫组化和Western,而如果抗体识别构象形表位,则只能用于免疫组化。一般抗体说明书上都有注明此种抗体识别的氨基酸区间。
elisa检测到目的蛋白但是wb怎么都做不出来
您好,现在这个行业发展的不错,生物实验技术外包也会跟着发展,比如一些高校或者企业部分实验不想自己内部开展,或者涉及的设备比较昂贵,技术要求高,都会寻求外包。但是现在竞争也比较大,的得看单位这边整体做的怎么样。
泛素化经常wb显不出来的原因如下:抗体问题:使用的抗体不够特异或者不适合于Westernblot分析。确保使用的抗体是经过验证并且具有较高的特异性。
样品上样量不足或目的蛋白浓度过低。解决方法:加大上样量或浓缩样品 转膜效率低。解决方法:以下单列 抗体浓度低。解决方法:增加抗体浓度或延长孵育时间 显色剂底物浓度不足。
一抗不纯 纯化抗体 一抗或者二抗浓度偏高 降低抗体浓度。可能的原因及建议 检测样本不表达目的蛋白 选择表达量高的细胞作为阳性对照,用于确定检测样本是否为阴性。
如果检测的目的蛋白未显影,而阳性对照有显影(内参),那么有可能是一抗抗体与目的蛋白不匹配,或者目的蛋白未表达。
ELISA试剂盒可以用来做WESTERN吗
1、ELISA的抗体可以用来做western,不一定能够做免疫组化,因为抗体的滴度不同。
2、ELISA试剂盒(昊航科贸0531-88930318)转膜:常用的有PVDF膜和NC(硝酸纤维素)膜。硝酸纤维素膜比较脆,在操作过程中特别是用镊子夹取等过程中容易裂开。PVDF膜使用前需要用甲醇浸泡。目前较为常用的是0.45的PVDF膜。
3、好多人有个误区,拿来一个指标就想当然地尝试用ELISA去检测,其实应该多动脑,该检测活性的检测活性,该做western的做western。ELISA试剂盒检测方法简单,灵敏度高。
4、可以是抗原 抗体 二抗酶,也可以是抗原 抗体 抗原酶,或者抗体 抗原 抗体酶等等 western blot更偏向于定性的检测,定量也只能是通过比较的半定量,误差可能很大 ELISA既可以定性也能非常精确的定量。
5、WB可以反映出分子量的信息,ELISA不能。WB一般只能做到半定量,ELISA一般可以定量。检测不同:基因翻译蛋白质, PCR可以检测基因的表达量,绝对定量和相对定量。
6、酶联免疫吸附实验(ELISA) ,蛋白质印迹法(免疫印迹试验)即Western Blot,二者在原理上、应用上有区别,具体如下:原理不同 蛋白质印迹法,其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。
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