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wb实验流程及注意事项有哪些?
注意事项：将A和B两种试剂在保鲜膜上等体积混合；1min后，将膜蛋白面朝下与此混合液充分接触；1min后，将膜移至另一保鲜膜上，去尽残液，包好，放入X-光片夹中。
样品制备 首先需要准备样品，如细胞粉碎液或组织匀浆等。样品需在最佳条件下储存和处理，避免其蛋白质失活和降解。通常情况下，可以将样品加入SDS-PAGE样品缓冲液中，然后进行煮沸、离心等操作以去除残留颗粒和气泡等。
倡议在实验中采用适宜的曝光时间。 条带弥散或外形怪异 有时WB 结果图中条带位置契合预期，但却由于条带弥散、外形怪异等要素招致无法运用，呈现这种状况多半是制胶或电泳过程出了问题，详细如下： ① 电泳时电压、电流过高。
wb的实验步骤 制样：裂解缓冲液或者超声处理。(使用RIPA裂解液是需按照100：1加入蛋白酶抑制剂)。电泳：根据蛋白大小确定合适的PAGE胶浓度，推荐上样量为20-30ug总蛋白。转膜：湿转和半干转都可。
有机溶剂提取法；3 离心管柱提取法：超快速，易用，高产及重复性强；4 通过层析或电洗脱法制备目的蛋白。
抗核抗体的正常值是多少
抗核抗体正常值小于1：10（阴性），滴度大于1：10为阳性。抗核抗体220u/ml表示抗核抗体阳性，且滴度较高。
抗核抗体主要是一组对细胞核内的DNA2a蛋白，正常值参考范围是阴性或者是小于1：40。抗核抗体(antinuclear antibody，ANA)，又称抗核酸抗原抗体，是一组对细胞核内的DNA、RNA、蛋白或这些物质的分子复合物产生的自身抗体。
阴性或32。抗核抗体（antinuclearantibody，ANA），又称抗核酸抗原抗体，是一组对细胞核内的DNA、RNA、蛋白或这些物质的分子复合物产生的自身抗体。
在一般的情况下，抗核抗体正常值是阴性或者是小于1：40。抗核抗体能识别各种细胞核组分，可特征性的出现于许多自身免疫性疾病过程中，尤其是风湿性疾病，可以判断疾病的活动性以及预后，观察治疗反应，指导临床治疗。
抗核抗体的正常值和它的检测方法有关，如果是免疫荧光法检测，它的正常值是小于1：80，而对于一些酶联免疫吸附法或者是其它方法检测，一般是在1：100。
fitc荧光标记原理
fitc荧光标记原理如下：FITC异硫氰酸荧光素是一种常用的标记抗体的方法。FITC一般为黄色。棕色或棕色粉末或结晶，在低温下可保存数年。
victoria的水母中发现。其基因所产生的蛋白质，在蓝色波长范围的光线激发下，会发出绿色萤光。这个发光的过程中还需要冷光蛋白质aequorin的帮助，且这个冷光蛋白质与钙离子(ca2+)可产生交互作用。
免疫荧光技术是将荧光素如异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate，FITC)与相应抗体（或抗原）以化学的方法结合，将荧光标记抗体（或抗原）与标本中相应的抗原结合形成荧光标记的抗体- 抗原复合物，用荧光显微镜观察。
fitc产生的荧光颜色是黄绿色。FITC异硫氰酸荧光素是一种有机荧光染料，目前，这种荧光染料仍用于免疫荧光和流式细胞术中。
酶标记抗体的注意事项
1、封闭 ①包被之后一定要立即封闭（封闭非特异性抗体）。②选择效果较好的封闭剂（细胞培养级BSA、Tween等）。加样及孵育 ①加样时应将所加物加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。
2、这包括酶标板、抗原或抗体、标记的二抗、底物、缓中液等。在准备试剂时，要注意避免受到污染，尽量在洁净的实验环境中操作。同时，要按照实验方案严格控制试剂的使用量，避免浪费和交叉污染。
3、⑶ 酶标记抗体工作浓度的选择：首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定（见酶标记抗体部份）。
4、(2)具有可与抗原、抗体共价结合的基团，标记后酶活性保持稳定，而且不影响标记抗原与抗体的免疫反应性。(3)酶催化底物后产生的信号产物易于判定或测量，且方法简单、敏感和重复性好。
