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如何设计带flag标签的引物
第一，标签设计的准确性原则标签设计的准确性原则就表现于标签内容的准确性，即每一个标签设计的标签所要表达的内容必须是准确有效的，才能够吸引读者进行阅读。
鉴定：通过蛋白质浓度测定、SDS-PAGE凝胶电泳、Western blot等技术对纯化后的蛋白质进行鉴定和分析。纯化FLAG标签蛋白的具体条件和步骤可能会因实验设计和目标蛋白的特性而有所不同。
第一步肯定是要确定你融合标签的目的，蛋白纯化首选His-Tag，WB优先选Flag-Tag。 其次蛋白标签对目的蛋白的影响：标签可能会干扰蛋白的正确折叠，因此需要考虑添加的标签是否对目的蛋白的表达有影响。
带flag标签的蛋白，用其他的抗体也能检测出来。用flag抗体还是其他抗体条带的位置都正确。lag标签一般不影响细胞定位的，这个蛋白本身的细胞定位是哪里，融合之后还是哪里啊。
一般是通过设计软件，例如oligo6，primer5等，你可以在网上搜一下引物设计软件下载和使用说明，是比较容易的。我一般用DANMAN设计引物，这个软件操作简单，占用资源也小。
在FLAG标签的基础上，将3个FLAG标签串联在一起，便形成了一个由22个氨基酸组成的3×FLAG标签。
被狗咬,打了疫苗,有抗体了,假设以后再也没有接触狂犬病毒,还会感染狂犬...
（“带毒”是医学术语，意思是“有传染性”，这里“不带毒”指的是，即使猫狗携带了狂犬病病毒，在它们没有发病前，是不具备传染性的。） “10天观察法”。
打过狂犬疫苗后，一般都比较安全，只要打疫苗及时。如果是完全家养，健康的狗狗，是不携带狂犬病毒的，也就不存在传染。如果是被外面的流浪狗高位咬伤，最好打封闭针，在伤口周边。
不排除发病，你是什么时候接种的疫苗？一般咬伤后预防 0天(当天)、3天、7天、14天、30天；无咬伤预防0天(当天)、7天、21天。(1)咬伤后预防。
什么叫做“表达文库”
表达文库是用表达载体构建。载体中除上述元件外，还具有控制基因表达的序列(如启动子、SD序列、ATG、终止子等)，可在宿主细胞中表达出克隆片段的编码产物。表达载体又有融合蛋白表达载体及天然蛋白表达载体之分。
关于10X 公司3‘和5’基因表达文库的差异，官方给出的解释如下：这两者很相似，但在最终的文库中，捕获的是不同的多聚腺苷酸化转录本末端。
之后可作类似3 v2 library的多轮PCR，构建得到5 基因表达文库，如下图红框所示。而同步可进行的，是V(D)J enriched 文库的构建。
然后从文库中用下述两种方法进行基因筛选，其一是将纯化的蛋白质进行氨基酸测序，据此合成寡核苷酸探针，从cDNA文库或基因组文库中筛选编码基因；其二是将编码蛋白质制成相应抗体探针，从cDNA载体表达文库中筛选相应克隆。
基因文库的构建是目前基因工程的核心工作，也是分离目的进的常用方法之一。3 功能蛋白组分离目的基因 蛋白组是指细胞内全部蛋白的存在及活动方式，即基因组表达产生的总蛋白质的统称。
