wb抗原抗体结合原理_wb一抗原理

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WB实验是通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）将混合蛋白质样品分离后，利用特殊虹吸或电场装置印迹至固相介质（例如PVDF膜）上，再以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原。

显色和定量添加显色底物ECL来激发膜上的酶活性，并对目标蛋白进行显色和成像。成像前需要去除背景信号，如亚硫酸盐洗涤等，以确保检测结果的准确性。通过比较信号的强度和大小来定量目标蛋白的表达水平。

WB实验是通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）将混合蛋白质样品分离后，利用特殊虹吸或电场装置印迹至固相介质（例如PVDF膜）上。

实验中取胶和膜需带手套。 Western可以参考如下步骤进行操作。收集蛋白样品(Protein sample preparation) 可以使用适当的裂解液，例如碧云天生产的Western及IP细胞裂解液，裂解贴壁细胞、悬浮细胞或组织样品。

一抗是针对特定抗原的特异性抗体，可以与抗原结合，从而将抗原固定在固相支持物上，二抗是针对一抗的抗体，可以与一抗结合，从而间接地检测抗原。

第一次免疫反应是为了让一抗结合目的蛋白，也可以说是让一抗特异性的识别出目的蛋白。

wb实验中一抗和二抗的作用如下：二抗都是重复利用的。一般都是使用3次左右（时间不超过5天）；做GAPDH时，二抗甚至经常使用5-7次，效果无影响。

WB实验是通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）将混合蛋白质样品分离后，利用特殊虹吸或电场装置印迹至固相介质（例如PVDF膜）上。

基本原理是将目标蛋白从复杂的混合物中分离并电泳到聚丙烯酰胺凝胶上，将电泳分离的蛋白转移到膜上，通过特异性抗体的识别来检测目标蛋白的表达水平。下面是WB实验的一般流程及注意事项。

一抗检测原理：将待测血清与乙肝表面抗原（HBsAg）结合，形成抗原-抗体复合物。然后使用特定的抗体与这个复合物结合，这个特定的抗体被标记上了一种检测信号，如荧光素或酶。