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DNA荧光组织化学染色的方法
1、在应用中,常用的方法是免疫荧光组织化学中间接法和SABC-Cy3法相结合。例如,在实验设计时,选择小鼠抗大鼠A和兔抗大鼠B作为两种不同的特异性一抗,相匹配的二抗分别为FITC-抗小鼠IgG和生物素化―抗兔IgG。
2、核酸经过染色才能显示带型,最常用的是溴化乙锭染色法。溴化乙锭(EB)是一种荧光染料,这种扁平分子可以嵌入核酸双链的配对的碱基之间,在紫外线激发下,发出红色荧光。
3、激光扫描共聚焦显微镜成像原理LSCM采用激光束作为光源, 通过共聚焦成像系统, 使得只有聚光镜聚焦到样品中某个焦点上所产生的激发荧光才能成像, 而来自焦点以外的散射光被小孔或狭缝遮挡, 无法在显示器上面显示荧光信号。
4、dna用甲基绿和二苯胺试剂染色。甲基绿 甲基绿—哌洛宁对DNA和RNA有选择性的染色效果。碱性的甲基绿-哌洛宁混合染料处理细胞后,由于DNA、RNA对染料具有的亲和力不同,而使这两种染料对两类核酸具有了选择性。
间接免疫荧光法检测抗ds-DNA使用的抗原为
1、ds-dna定量检测是:酶联免疫吸附法联合定量检测抗 dsDNA 抗体和抗 ssDNA 抗体筛查,对疑似患者可以采用特异性高的检测方法如间接免疫荧光法辅助确认。
2、解析:目前用于检测患者血清中的dsDNA的最佳方法是用马疫锥虫或绿蝇短膜虫作为基质进行间接免疫荧光法,因为这些血鞭毛寄生虫的虫体呈圆形或椭圆形,其动基体由纯净的环状dsDNA构成,除此以外通常不含有其他细胞核抗原 。
3、evansi)作底物,采用间接免疫荧光法检测抗ds-DNA抗体,在SLE活动期其阳性率可高达93%~100%。然而放射免疫法检测其阳性率为60%~70%,抗ds-DNA抗体荧光核型显示周边型最具特异性,提示患者常有肾损害、预后差。
4、也是再次免疫应答的主要抗体,是唯一能通过胎盘的抗体,大多数抗菌抗体、抗病毒抗体是IgG,某些自身抗体及超敏Ⅱ型抗体是IgG,免疫学检测中第二抗体也以IgG为主。
5、)免疫荧光法检测抗核抗体:该法以小鼠肝细胞、Hep-2细胞(人喉癌上皮细胞株)、Hela细胞(官颈癌细胞株)或小鼠腹水癌细胞等作为抗原片,以Hep-2细胞抗原片敏感性较高。
关于细胞免疫荧光染色的问题
免疫荧光染不上色的原因可能有以下几种: 样品处理不当,如未正确去除细胞外的蛋白质、细胞壁等物质,或者样品处理时间过长或温度过高导致细胞结构破坏。
染色不佳:染色方法不当或试剂质量不佳,有概率导致平滑肌细胞染色过度,从而呈现红色。抗原定位错误:若在免疫组化实验中,平滑肌细胞的抗原定位为细胞核或细胞浆,而不是在细胞表面,那么染色也有概率会呈现红色。
免疫荧光染星胶是一种用于检测蛋白质在细胞中的定位和分布的方法。
【答案】:B 在流式免疫技术中,最常用的染料有异硫氰酸荧光素(FITC)和藻红蛋白类(PE)、罗丹明。FITC是免疫荧光标记最常用的荧光探针,可产生亮绿色荧光。德州红是罗丹明的衍生物,产生红色荧光。
洗涤步骤:洗涤步骤是关键,应该进行充分的洗涤,以去除非特异性结合的抗体和杂质。洗涤缓冲液的成分和洗涤次数要根据实验条件进行优化。荧光染色:在进行荧光染色时,注意使用适当的染料和荧光标记物。