本篇目录:
小鼠腹水单克隆抗体制备原理
从小鼠腹水中收集抗体,是因为腹腔注射法方便快捷,腹水收获容易,抗体产量高。此外,可以在腹水中得到单克隆抗体。
抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官,刺激相应B淋巴细胞克隆,使其活化、增殖,并分化成为致敏B淋巴细胞。细胞融合 采用二氧化碳气体处死小鼠,无菌操作取出脾脏,在平皿内挤压研磨,制备脾细胞悬液。
两种亲本细胞经PEG处理后,可形成多种细胞成分的混合体,包括未融合的游离亲本细胞、骨髓瘤细胞间的融合、免疫B细胞间的融合以及骨髓瘤细胞与免疫B细胞间融合的异核细胞,仅后者可形成杂交瘤,应予以筛选出来克隆培养。
他们培养杂交瘤细胞,从中挑选出能够产生所需抗体的细胞群,继续培养,已获得足够数量的细胞,在体外条件下作大规模培养或注射到小鼠腹腔内增值。这样,从细胞培养液或小鼠的腹水中,就可以提取大量的单克隆抗体了。
所以制备单克隆抗体的技术又称杂交瘤技术(hybredoma technique)。基本原理 其原理是:B淋巴细胞能够产生抗体, 但在体外不能进行无限分裂; 而瘤细胞虽然可以在体外进行无限传代, 但不能产生抗体。
④将选择细胞进行规模培养或注射到小鼠腹腔内增殖(活体培养基);⑤从细胞培养液或小鼠腹水中提取大量的单克隆抗体。单克隆抗体技术的重大意义在于可以用不纯的抗原分子制备特异性强、纯度高、均一性好的单克隆抗体。
小鼠单克隆抗体的制备过程是怎样的?义翘神州可以提供抗体制备服务...
【答案】:基本原理:小鼠骨髓瘤细胞在体外适当条件下可无限增殖,但不能分泌抗体,而抗原免疫小鼠的脾细胞(B细胞)能产生抗体,但不能在体外无限增值。将两种细胞融合和就同时具有了无限增殖和分泌抗体的功能。
(一)脾细胞 1.材料 (1)免疫过的血清抗体滴度高的Balb/c鼠。 (2)1640培养液 单克隆抗体制备流程 (3)5%FCS-1640营养液 2.操作方法 (1)拉颈或用CO2处死小白鼠。
单克隆抗体的大量制备主要采用动物体内诱生法和体外培养法。
过程 1)免疫脾细胞的制备 制备单克隆抗体的动物多采用纯系 Balb/c小鼠。免疫的方法取决于所用抗原的性质。免疫方法同一般血清的制备,也可采用脾内直接免疫法。
单克隆抗体制备的过程:免疫动物 免疫动物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性BALB/c小鼠,按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。
还需进行克隆化培养和抗体检测,经多次筛选,就可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。最后,将杂交瘤细胞在体外条件下做大规模培养或注射到小鼠腹腔内增殖,这样,从细胞培养液或小鼠腹水中就能提取出大量的单克隆抗体了。
单克隆抗体制备的基本原理与过程?有什么意义
1、单克隆抗体技术的重大意义在于可以用不纯的抗原分子制备特异性强、纯度高、均一性好的单克隆抗体。单克隆抗体的应用:①医学诊断;②抗原蛋白的提纯;③肿瘤的导向治疗和放射免疫显像技术。
2、进行体内或体外培养。体内培养就是将杂交瘤细胞注入实验动物腹腔,将来从腹水中提取。
3、【答案】:基本原理:小鼠骨髓瘤细胞在体外适当条件下可无限增殖,但不能分泌抗体,而抗原免疫小鼠的脾细胞(B细胞)能产生抗体,但不能在体外无限增值。将两种细胞融合和就同时具有了无限增殖和分泌抗体的功能。
4、所以制备单克隆抗体的技术又称杂交瘤技术(hybredoma technique)。基本原理 其原理是:B淋巴细胞能够产生抗体, 但在体外不能进行无限分裂; 而瘤细胞虽然可以在体外进行无限传代, 但不能产生抗体。
5、单克隆抗体原理 抗体主要由B淋巴细胞合成。每个B淋巴细胞有合成一种抗体的遗传基因。动物脾脏有上百万种不同的B淋巴细胞系,含遗传基因不同的B淋巴细胞合成不同的抗体。
6、单克隆抗体技术原理如下:由单一B细胞克隆产生的高度均仅针对某一特定抗原表位的抗体,称为单克隆抗体。