线粒体标记和抗体怎么共染（线粒体抗体分型）

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一般进行转染的细胞应该处于对数生长期。如果是贴壁细胞的话，贴壁率应该在70-80%；如果是悬浮细胞的话，应该是6×10^5个/孔（24孔板），一般是转染前一天换液，转染前用无血清培养基或PBS洗细胞一次。

避免使用含有甲醇或丙酮的固定剂，这些会破坏肌动蛋白的结构而影响鬼笔环肽染色效果。悬浮细胞可以使用 poly-D-Lysine 的板或盖玻片贴壁，然后使用贴壁细胞方案染色。

对于贴壁细胞或组织切片，加入少量 DAPI 染色液，覆盖住样品即可；对于悬浮细胞，至少加入待染色样品体积 3 倍的染色液，混匀。室温染色 5-10 分钟。

对于贴壁细胞：可以直接用多孔板，例如6孔板、24孔板等，培养细胞，然后到预定时间时进行固定等后续操作。

脂质体转染时悬浮细胞的转染效率要明显低于贴壁细胞。

注意事项：台盼蓝对人体有毒台盼蓝染细胞时，时间不宜过长。否则，部分活细胞也会着色，会干扰计数。台盼蓝染色法对于悬浮细胞来说，还比较方便，对贴壁细胞来说，较为繁琐。

荧光抗体技术是以荧光物标记抗体进行抗原定位的技术。本技术较其他鉴定细菌的血清学方法有速度快、操作简单、敏感性高等特点，它在临床检验上已用作细菌、病毒和寄生虫的检验及自身免疫病的诊断等。

荧光素被用于免疫荧光技术（又称荧光抗体技术），这是标记免疫技术中发展最早的一种。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。

荧光抗体检测技术性质：用荧光物标记抗体来检测细胞或组织中相应抗原或抗体的技术。ELISA性质：将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法。

免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体（或抗原）上，与其相应的抗原（或抗体）结合后，在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。

以下是几种常用的免疫学技术：1．免疫荧光技术免疫荧光技术是利用荧光素标记的抗体（或抗原）检测组织、细胞或血清中的相应抗原（或抗体）的方法。

1、健那绿染液。因为健那绿染液可使线粒体呈现蓝绿色，而细胞质接近无色，可以在高倍显微镜下观察线粒体分布和形态。

2、健那绿溶液健那绿染液是一种将活细胞中线粒体染色的专用染料，可以使活细胞中的线粒体呈现蓝绿色。线粒体中细胞色素氧化酶将染料保持氧化状态(即有色状态)呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。

3、因为健那绿染液可使线粒体呈现蓝绿色，而细胞质接近无色，以在高倍显微镜下观察线粒体分布和形态。其原理是线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态(即有色状态)呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。

4、线粒体用健那绿染液，健那绿染液常用作线粒体专一性活体染色剂，可以将线粒体染成蓝绿色。线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态(即有色状态)呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。

5、而在周围的细胞质中染料被还原成为无色状态，因此可以使活细胞的线粒体呈现蓝绿色。而细胞质接近无色。线粒体能在健那绿染液中维持活性数小时，通过染色，可以在高倍显微镜下观察到生活状态的线粒体的形态和分布。

6、首先电镜是用高能电子而不是用光作为媒介因此只有灰，银色和金色适合，其概念就不是染色了！常用超薄切片和冰冻蚀刻术。

针对不同抗原，每种抗体是不同荧光素标记的就可以了。目前，就算是在16色共染的实验中，所有抗体基本都是小鼠的单克隆抗体。

一抗都是兔抗不能共染的就是先染一个抗原，再染另一个抗原，这样比较方便，对于两个一抗种属可以是一样的。

两个荧光一抗是同一种属的做法：对其中一个荧光染色之后再加DAPI复染，回避引入两个二抗的冲突。免疫荧光标记的一抗的要求主要有。一抗是单抗。

一步双染色法先将两种荧光标{己抗体按适当比例混合(A+B)，按直接法进行染色。

1、根据不同的情况，质粒之间可能发生以下几种反应：互补碱基配对：质粒上存在相互互补的碱基序列，如果两个质粒都具有互补的序列，则可以通过碱基互补配对反应而结合在一起。

2、构建双荧光素酶质粒：在双荧光素酶质粒中，通常包含两个荧光素酶基因，例如火鸟荧光素酶（Firefly luciferase）和海蛇荧光素酶（Renilla luciferase），以及相应的启动子和响应元件。

3、转染两个质粒可以是相同荧光。根据查询相关公开信息显示：两个质粒同时转染至同一细胞中，它们都携带了绿色荧光蛋白基因，拥有相同的荧光，所以转染两个质粒可以是相同荧光。

Abbkine的线粒体染色试剂盒是一套用于标记活细胞线粒体的荧光成像工具。试剂盒使用了两种专利的线粒体绿色荧光染料(Ex/Em=490/523nm)或橘红色荧光染料(Ex/Em=579/599nm)。

人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色观察 (1) 取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上，滴2 滴詹纳斯绿B 应用染液。

线粒体用健那绿染液，健那绿染液常用作线粒体专一性活体染色剂，可以将线粒体染成蓝绿色。线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态(即有色状态)呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。

将细胞放在含有放射性核酸底物的培养基中进行培养，然后从这种细胞中分离DNA或RNA，由于细胞在生长过程中掺入了放射性的底物，因而被带上了标记。

在实验中，可以使用荧光染料或者荧光蛋白等标记物标记线粒体，观察细胞在荧光显微镜下的荧光信号。