本篇目录：
- 1、抗体药物的制备工艺路线有哪些?如何选择使用?如何保证抗体活性
- 2、如何利用杂交瘤技术制备单克隆抗体
- 3、western抗体用量怎么用?
- 4、il-1β跑出来的条带不是31
- 5、验证单克隆抗体是否好用,一般稀释浓度是多少?
- 6、如何使用脱脂牛奶做蛋白印迹实验的封闭?
抗体药物的制备工艺路线有哪些?如何选择使用?如何保证抗体活性
1、人工制备抗体是获得大量抗体的重要途径。制备方法有按常规动物免疫方法获得的多克隆抗体，用杂交瘤技术制备的单克隆抗体和近年来发展的基因工程抗体法。
2、（1）多克隆抗体的制备。①免疫方法：对多克隆抗体，免疫方法一般有皮下或肌肉免疫法、皮内免疫法、淋巴结免疫法和混合法等。
3、对抗体进行浓缩和保存。在免疫过程中，需要选择合适的佐剂和抗原，以产生良好的免疫反应。通常，首次免疫使用完全佐剂，后续免疫使用不完全佐剂。在免疫后的几周内，需要定期采集兔子的血液样本，以检测抗体效价。
4、在使用逆合成分析法进行药物合成工艺路线设计的过程中，切断位点的选择是决定合成路线优劣的关键环节。 切断位点选择要以化学反应为依据，即“能合才能分”。
5、方法：通常采用流式细胞术（流式细胞仪）或细胞融合技术进行终次筛选。目的：终次筛选的目的是进一步筛选出具有更高亲和力和特异性的单克隆抗体。
6、选用BALB/c小鼠或其亲代小鼠，先用降植烷或液体石蜡行小鼠腹腔注射，一周后将杂交瘤细胞接种到小鼠腹腔中去。通常在接种一周后即有明显的腹水产生，每只小鼠可收集5～10ml的腹水，有时甚至超过40ml。
如何利用杂交瘤技术制备单克隆抗体
1、杂交瘤技术是一种将B细胞与骨髓瘤细胞融合生产小鼠单克隆抗体的传统方法，是目前应用最广泛的单克隆生产技术。在这种技术中，首先收集免疫小鼠的B淋巴细胞，并将其与BALB/c小鼠骨髓瘤细胞融合，从而形成永生化的杂交瘤细胞。
2、【答案】：经筛选和克隆化的杂交瘤细胞仅能合成及分泌单一抗原表位的特异性抗体，是单克隆抗体。
3、网上看到个这个。。增量培养法，即将杂交瘤细胞在体外培养，在培养液中分离单克隆抗体。该法需用特殊的仪器设备，一般应用无血清培养基，以利于单克隆抗体的浓缩和纯化。
western抗体用量怎么用?
按照所用抗体说明书，用TBST按说明书建议比例稀释一抗进行孵育，因抗体都很珍贵，一般用量在稀释后2-5毫升即可，用封膜机进行封膜孵育。
未纯化的血清抗体，如果是初次使用，建议采用不同的抗体浓度，例如1：100，1：500，1：1000，1：2000设几个梯度，因为完全不了解里面有多少效价的抗体，不做任何预实验的话，很难判断哪个浓度能否检测到目标蛋白。
抗体孵育，免疫反应 第一步：回收封闭液，加入一抗，摇床30min-1h，4℃过夜，再孵育30min-1h。第二步：一抗回收，用PBST洗，洗5次，每次5min。（少时多次）第三步：加二抗，孵育2h。
一般根据抗体的特异性和亲和度。一抗的浓度范围比较大，从1：200到1：1000都有，这个要多做几次才能确定。二抗的稀释倍数打，一般用1：5000到1：10000就可以了。
Western Blot与Southern印迹杂交或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。
il-1β跑出来的条带不是31
IL-1β 初始产生时是一个 31KD 的前体，接着裂解活化产生 17KD 的成熟形式，这样才可以与 IL-1 受体结合。
当身体遭受感染或其他损伤时，IL-1会被释放出来，并促使免疫系统去做出反应。IL-1偏高是指在某个人的身体内，他们的IL-1水平高于正常范围。这通常是身体重度炎症反应的表现。
如果您的电泳Marker条带歪了，可能是由于以下原因之一： 电泳槽放置不水平：如果电泳槽放置不水平，会导致电泳时Marker的分离效果受到影响，从而出现歪斜的情况。
首先要排除琼脂糖凝胶配制的是否正确，如果齿孔不规则或残余凝胶颗粒则会使条带不规则；检查电泳槽的电极是否出现移位、歪斜；考虑更换电泳缓冲液；电压不要太高，否则凝胶会受热。
验证单克隆抗体是否好用,一般稀释浓度是多少?
一般至少1：3000，好的单抗一般在1：10000以上。
一般根据抗体的特异性和亲和度。一抗的浓度范围比较大，从1：200到1：1000都有，这个要多做几次才能确定。二抗的稀释倍数打，一般用1：5000到1：10000就可以了。
在检测腹水类单抗时要稀释到1/5万，虽然可以分辨但并不建议您这样做。此类样品成分十分复杂，有干扰结果的可能。在此种情况下您可以选择本公司的C030215抗体鉴定试剂。它会给您带来满意的结果。
棋盘滴定法选择抗体的最适工作浓度 a) 用包被缓冲液稀释单克隆抗体，浓度分别为10ug/ml、0ug/ml、5ug/ml、0ug/ml， 包被酶标板，每一浓度包被三个纵行，每孔100ul，每孔均作复孔。
如何使用脱脂牛奶做蛋白印迹实验的封闭?
小时至2小时。wb脱脂奶封闭室温1至5h就可以，5%脱脂牛奶封闭时间2h；10%脱脂牛奶封闭时间1h；回收会稍微延长一些时间。时间充裕选择5%脱脂牛奶封闭2h效果最好。
小时至2小时。wb脱脂牛奶封闭1小时至2小时，WB实验的基本核心理念是抗原抗体的特异性反应，通过变性胶SDS-PAGE将不同分子量的蛋白质分离开，然后转移到固相载体PVDF膜上，再用脱脂牛奶作为封闭液进行封闭。
推荐用TBST进行稀释获得5%的牛奶封闭液（5g/100mL）。拓展：牛血清白蛋白(BSA)，又称第五组分，是牛血清中的一种白蛋白，包含583个氨基酸残基，分子量为6430 kDa，等电点为7。
