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染色质免疫沉淀技术的优缺点?
1、缺点是:需要一个特异性蛋白质抗体,有时难于获得;为了获得高丰度的结合片段,必须实验演示胞内条件下靶标蛋白质的表达情况;调控蛋白质的基因的获取可能需要限制在组织来源中。
2、染色质免疫沉淀后测序( ChIP seq )是一种针对DNA结合蛋白、组蛋白修饰或核小体的全基因组分析技术。由于二代测序技术的巨大进步,ChIP-seq比其最初版本ChIP-chip具有更高的分辨率、更低的噪声和更大的覆盖范围。
3、免疫共沉淀基于抗原抗体特异性结合的原理,体外验证两种分子之间是否存在相互作用的技术。它是免疫沉淀的延伸。基本原理是在含有已知抗原的细胞裂解液中,将已知抗原作为靶蛋白,检测裂解液中可能存在与之有相互作用的蛋白。
4、染色质免疫沉淀法(Chromatinimmunoprecitation,ChIP)是研究体内DNA与蛋白质相互作用的重要工具。它可以灵敏地检测目标蛋白与特异DNA片段的结合情况,还可以用来研究组蛋白与基因表达的关系。
5、染色质免疫共沉淀技术是在保持组蛋白和DNA联合的同时,通过运用对应于一个特定组蛋白标记的生物抗体,染色质被切成很小的片断,并沉淀下来的技术。
chip-chip的原理
1、chip-chip是染色质免疫共沉淀技术(ChIP)及与芯片方法的结合。应用 ChIP-chip技术对于大规模挖掘顺式调控信息成绩卓著,同时它可以用于胚胎干细胞和一些疾病如癌症、心血管疾病和中央神经紊乱的发生的机制。
2、CHIP原理 利用抗体专一性特征,检测蛋白质-蛋白质相互作用。染色质免疫共沉淀 研究蛋白质与核酸相互结合的技术。甲醛固定时,相互靠近的蛋白与蛋白,蛋白与核酸(DNA或RNA)之间会产生共价键。
3、ChIP-chip在描述转录结合因子动力学中的研究、染色体结构组分的分布、在组蛋白的修饰、组蛋白修饰蛋白和染色体重建中的应用也十分广泛。
4、由于二代测序技术的巨大进步,ChIP-seq比其最初版本ChIP-chip具有更高的分辨率、更低的噪声和更大的覆盖范围。随着测序成本的降低,ChIP- seq已成为研究基因调控和表观遗传机制不可或缺的工具。
5、RNA-CHIP用于研究RNA在基因表达调控中的作用。由此可见,随着CHIP的进一步完善,它必将会在基因表达调控研究中发挥越来越重要的作用。
染色质免疫共沉淀的一般流程
免疫沉淀实验从:蛋白样品处理;抗体-agarose beads孵育;抗体-agarose beads复合物洗涤到最后的鉴定,每步都非常关键,需要严格控制实验流程中每个关键步骤的质量,才能最终达到你的实验目的。
染色质免疫沉淀技术(chromatin immunoprecipitation assay, CHIP) 是目前唯一研究体内DNA与蛋白质相互作用的方法。
简单原理:首先通过 染色质免疫共沉淀 技术(ChIP)特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段,并对其进行纯化与文库构建;然后对富集得到的DNA片段进行 高通量测序 。
染色质免疫共沉淀的技术
1、因此,研究蛋白质与DNA在染色质环境下的相互作用是阐明真核生物基因表达机制的基本途径。染色质免疫沉淀技术(chromatin immunoprecipitation assay, CHIP) 是目前唯一研究体内DNA与蛋白质相互作用的方法。
2、染色质免疫共沉淀技术是在保持组蛋白和DNA联合的同时,通过运用对应于一个特定组蛋白标记的生物抗体,染色质被切成很小的片断,并沉淀下来的技术。
3、染色质免疫共沉淀技术是目前唯一研究体内DNA与蛋白质相互作用的方法,是在表观遗传学研究和转录因子调控机制研究中发现的。
4、chip-chip是染色质免疫共沉淀技术(ChIP)及与芯片方法的结合。应用 ChIP-chip技术对于大规模挖掘顺式调控信息成绩卓著,同时它可以用于胚胎干细胞和一些疾病如癌症、心血管疾病和中央神经紊乱的发生的机制。
5、ChIP-Seq的原理是:首先通过染色质免疫共沉淀技术(ChIP)特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段,并对其进行纯化与文库构建;然后对富集得到的DNA片段进行高通量测序。
6、染色质免疫沉淀(ChIP)技术是一种在细胞或组织中检测特定染色质修饰和蛋白-DNA相互作用的方法。它具有以下优点和缺点:优点 高特异性:ChIP技术可以针对特定的染色质修饰或蛋白进行检测,具有很高的特异性。
什么是染色质免疫共沉淀技术(ChIP)?
1、染色质免疫共沉淀法是在保持组蛋白和DNA联合的同时,通过运用对应于一个特定组蛋白标记的生物抗体,染色质被切成很小的片断,并沉淀下来。
2、染色质免疫共沉淀 (Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)研究体内蛋白质与DNA结合的技术。
3、chip-chip是染色质免疫共沉淀技术(ChIP)及与芯片方法的结合。应用 ChIP-chip技术对于大规模挖掘顺式调控信息成绩卓著,同时它可以用于胚胎干细胞和一些疾病如癌症、心血管疾病和中央神经紊乱的发生的机制。
4、染色质免疫沉淀技术(chromatin immunoprecipitation assay, CHIP) 是目前唯一研究体内DNA与蛋白质相互作用的方法。
5、chip实验中取出1平皿细胞,加入243ul37%甲醛,使得甲醛的终浓度为1%,培养基共有9ml,温度设置37摄氏度孵育10min。