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流式细胞仪分析技术及应用
流式细胞仪技术 流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或荧光。
对淋巴细胞表面抗原进行连续检测可明确淋巴细胞分化过程中各阶段表面抗原的表达，并检出异常表型的淋巴细胞，它们往往是恶性肿瘤细胞，如恶性淋巴瘤的典型特征是单一表型的单克隆淋巴细胞群。
流式细胞术的原理和应用分别如下：原理：细胞标记：通过将目标细胞表面或内部特定结构与荧光染料结合，使其在激光束照射下发出荧光信号。这些荧光标记物可以是抗体、DNA探针或别的化学染料。
流式细胞仪(FCM)是集单克隆抗体、荧光化学、激光、计算机等高技术发展起来的一种先进仪器，已广泛应用于免疫学、生物化学、生物学、肿瘤学以及血液学等方面的研究和临床常规工作。
FCM在肿瘤中的应用(1)肿瘤诊断 DNA非整倍体的出现是癌变的一个重要标志。细胞的 增值能力大小也可反映肿瘤的生物学特征。因此临床上可利用流式细胞仪进行细胞周期分析和DNA倍体分析。
流式细胞术能在细胞分子水平上通过单克隆抗体对单个细胞或其他生物粒子进行多参数、快速的定量分析。它可以高速分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数，具有速度快、精度高、准确性好的优点。
流式细胞术的原理
1、流式细胞术是利用流式细胞仪对于处在快速直线流动状态中的细胞或生物颗粒同时进行多参数、快速定量分析和分选的高新技术。其特点是：第一，只要样本制备成单个细胞或生物颗粒悬液均可以分析。
2、FSC通道 FSC，即前向角散射，它的值代表细胞的 大小 。所以可以利用细胞的FSC值初步比较细胞的大小，利用FSC值对细胞进行分群和分类。SSC通道 SSC，即侧向角散射，它的值代表 细胞的颗粒度 （granularity）。
3、流式细胞术的基本原理是通过细胞特异性荧光染色或其他标记技术，将细胞分为不同的群体，并利用流式细胞仪进行多参数分析和排序。
4、流式细胞术工作原理是在细胞分子水平上通过单克隆抗体对单个细胞或其他生物粒子进行多参数、快速的定量分析。
5、原理：流式细胞仪可同时进行多参数测量，信息主要来自特异性荧光信号及非荧光散射信号。测量是在测量区进行的，所谓测量区就是照射激光束和喷出喷孔的液流束垂直相交点。
想做流式细胞分选实验,请教具体步骤
1、第一步就是设计，你的分选标记是什么，如果是表面抗体标记，标记后会不会诱导细胞启用，会不会影响下游的实验，这些都要弄明白。 第二步，选择你所要用仪器相容的荧光素。
2、流式细胞术实验：制备细胞悬液，计数 分装，按照每个EP（5ml）管1-2*10 6个细胞分装，3500rpm，4度离心。用100ulPBS重悬，加入10ul大鼠血清封闭，4度避光30min。
3、收集样本，如血液、尿液等。制备细胞悬液，包括稀释和分离细胞。选择适当的抗体和染料，对细胞进行标记。通过离心将细胞分离成不同的峰。用相应的检测设备检测每个峰上的标记物，并根据检测结果筛选目标细胞。
4、胞内染色：加入IFN-gamma；或IgG1的抗体20l，混匀，室温避光30分钟。加入2ml PBS，1000转，离心5分钟，弃上清。加入PBS 500l。上机前4度保存。1上机检测。
5、，加入相应的荧光标记的抗体，混匀，避光，4度孵育30min。5，加入1mlPBS洗两遍（3500rpm，4度，离心）。6，用200ul PBS重悬，经纱布过滤转至流式管，上级检测。
