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流式细胞仪抗体双标记双色荧光,需要准备哪些样品
（3） 细胞染色 离心收集细胞（800rpm/min），以1mL的PBS洗细胞一次，加入500uLPBS含50ug/mL溴化乙锭（PI），100ug/mL RNase A， 4℃避光孵育20分钟。
这个是T细胞表面标记。所以要准备好：被测样本的单细胞悬液。可以是去红细胞的血细胞，分离的淋巴结或者脾脏的细胞 准备4个管子，分别为无染色，单染CD3， 单染CD4和单染CD8，每管至少准备10-20万细胞。
染样本的时候，也要使用同样的细胞浓度来染。 除了要检测的样本外，另外还要准备无染色样本，每个抗体单独染色的阳性样本，作为调节荧光补偿之用。完成了这些后，就可以去检测你的样本了。
流式细胞术的基本步骤包括：细胞样品的制备：将需要进行分析和排序的细胞样品制备成单细胞悬液，保证细胞在流式细胞仪中流动时不会聚集在一起。
通过流式细胞仪进行细胞分选主要是在对具有某种特征的细胞需进一步培养和研究时进行的。
使用流式细胞仪(fluorescene-activated cell sorting，FACS)，能自动检测细胞的大小、荧光强度。针对细胞表面不同抗原，可以使用两种不同的荧光染料，如用异硫氰荧光素(FITC)发黄绿荧光，用罗丹明(TMRITC)发红色荧光。
流式检测细胞表面抗原能先固定再标记抗体吗
固定会改变抗原的空间结构，有些抗体的识别会受到影响。所以染细胞表面抗原的都不要固定。同时染胞内，胞外的，染好胞外的，在固定，破膜，染胞内的。
定量细胞浓度 分为2组，一组为实验组，另一组为抗体对照组 两组都先加入非特异性的IgG，封闭可能的Fc受体 按照抗体生产厂家的推荐浓度加入抗体，对照组加入同样荧光标记的非特异性同型抗体。
另外一种是荧光小珠为基础的，检测溶液内细胞因子。可以同时检测一个系列。小珠按照荧光种类和强弱的不同，表面事先固定好了相应的抗体。和样本混合后，在加入另外一种荧光标记的抗体。
它是一种通过先利用特异性抗体与特定细胞表面分子的结合，然后再用荧光染料标记抗体来检测细胞数量、种类和表达的一种分析手段。
流式细胞术(Flow Cytometry， FCM)是七十年代发展起来的高科学技术，它集计算机技术、激光技术、流体力学、细胞化学、细胞免疫学于一体， 同时具有分析和分选细胞功能。
间接流式细胞术是什么意思
1、流式细胞术(Flow Cytometry， FCM)是一种可以对细胞或亚细胞结构进行快速测量的新型分析技术和分选技术。
2、是一种生物学技术，用于对悬浮于流体中的微小颗粒进行计数和分选。这种技术可以用来对流过光学或电子检测器的一个个细胞进行连续的多种参数分析。
3、FC医学，全称为流式细胞术（Fluorescence-activated cell sorting，FACS）医学，是一种新型的分子诊断技术。该技术结合了最新的基因检测技术和流式细胞术技术，可以快速、准确地诊断人体遗传疾病、肿瘤等疾病。
4、流式细胞术是一种生物学技术，用于对悬浮于流体中的微小颗粒进行计数和分选。这种技术可以用来对流过光学或电子检测器的一个个细胞进行连续的多种参数分析。
5、可用于白血病的分型、肿瘤细胞染色体的异倍性测定，以及免疫学研究，并已开始用于细菌鉴定，病毒感染细胞的识别和艾滋病感染者TT8细胞的记数。自70年代以来，随着流式细胞技术水平的不断提高，其应用范围也日益广泛。
6、流式细胞术在免疫学中有着广泛的应用，其免疫荧光染色的标本制备非常重要，常常由于标本的制备过程中出现人为非特异性荧光干扰（尤其在间接免疫荧光染色中）或细胞浓度低等检测结果。解决这些影响因素的方法如下。
