本篇目录：
- 1、流式细胞术中样本加入Fc受体阻断剂什么作用
- 2、如何选择适合的流式抗体(五):举例
- 3、igg抗体的fc段的组成结构是
- 4、流式细胞术中非特异性显色是如何产生的
- 5、流式细胞术检测细胞表面抗原的步骤
流式细胞术中样本加入Fc受体阻断剂什么作用
1、除此外，样本中的死细胞不仅具有更强的自发荧光，而且更容易产生非特异性抗体的结合，造成假阳性。为了避免上述情况，在流式抗体染色前需要使用Fc受体阻断剂和鉴别死细胞的活性染料对Fc受体及死细胞造成的非特异性染色加以去除。
2、药理作用 短效类α受体阻断药：本类药物与α受体结合力弱，易于解离，作用温和，维持时间短（1~5小时）。由于此类与激动药之间有竞争性，又称竞争性α受体阻断药。
3、可用于白血病的分型、肿瘤细胞染色体的异倍性测定，以及免疫学研究，并已开始用于细菌鉴定，病毒感染细胞的识别和艾滋病感染者TT8细胞的记数。自70年代以来，随着流式细胞技术水平的不断提高，其应用范围也日益广泛。
如何选择适合的流式抗体(五):举例
1、第三荧光的颜色选择一是你的流式仪一定要能读，二是跟你需要counterstain的其他流式抗体错开频率。第四抗体的球蛋白亚型。因为要根据这个选择isotype对照用抗体。
2、单抗体。根据查询中国医学研究网显示，流式检测，都是要使用单抗。单抗的特异性好，染色后的荧光强度和抗原表达水平是线性关系，不同批次间的变化较少。
3、单抗的特异性好，染色后的荧光强度和抗原表达水平是线性关系，不同批次间的变化较少。多抗虽然可能可以产生更强的信号，但是特异性差，染色后荧光强度和抗原水平不是线性关系，不同批次差异很大。所以流式检测不使用多抗。
4、使用流式细胞仪进行检测用的抗体，一般是抗体和荧光的偶联物。
5、小鼠B细胞 CD45R/B220（相应mAb为RA3- 6B2）是小鼠全B细胞最常用标记，但这个标记也表达于活化T细胞、活化NK细胞和NK祖细胞。相对来说，CD19是B细胞较特异的标记。
igg抗体的fc段的组成结构是
1、Fc（可结晶片段）分别由：2个CH2个CH3（IgA，IgD，IgG）共4个结构域组成，或2个CH2个CH2个CH4（IgM，IgE）共6个结构域组成。
2、Fab段：抗原结合片段（fragment of antigen binding，Fab），相当于抗体分子的两个臂，由一个完整的轻链和重链的VH和CH1结构域组成。
3、Fc段即可结晶片段（fragment crystallizable，Fc），相当于IgG 的CH2和CH3结构域。Fc无抗原结合活性，是Ig与效应分子或细胞相互作用的部位。
4、抗原的结构基础。 IgG可被木瓜蛋白酶分解为三个区段，其中两个相同的区段称抗原结合片段(Fab)。每个Fab都保存结合抗原的能力，但只有一个抗原结合位点，是单价的，与抗原结合后不出现凝集或沉淀。
5、图为：IgG多为单体，能通过经典途径激活补体IgG是唯一能通过胎盘的抗体通过Fc段与吞噬细胞表面FcR结合，发挥调理作用；与K细胞结合，发挥ADCC作用；与葡萄球菌A蛋白结合。具有抗菌、抗毒和抗病毒作用参与II、III型超敏反应。
6、不少自身抗体 抗甲状腺球蛋白抗体和引起Ⅱ Ⅲ型超敏反应的抗体也属于IgG.IgG可经传统途径激活补体。各亚类激活补体能力不同，IgG是唯一能通过胎盘的Ig，是新生儿抗感染的重要因素。
流式细胞术中非特异性显色是如何产生的
流式的isotype对照（同型对照），就是使用相同标记，相同亚型的非特异性抗体，在另外一个管子的样本，采用同样的染色步骤染色。比如，你使用了小鼠IgG1，PE标记的特异性抗体，那就选用小鼠IgG1，PE标记的非特异性抗体。
多色流式实验中，检测指标越多，越容易发生荧光溢漏，对照在任何实验中都是必不可少的，尤其在流式细胞术中，只有合理对照才可以将实验结果和背景区分，排除非特异性的效应，获得高质量的数据。
非特异性染色常见的有间质着色、全片着色、切片边缘着色、着色区灶状分布等，表现为弥漫性，均匀性的背景染色，也可以是随机分布的阳性反应产物点、团或块状。
流式的isotype对照（同型对照），就是使用相同标记，相同亚型的非特异性抗体，在另外一个管子的样本，采用同样的染色步骤染色。
样品 样品是检测的前提，样品质量会直接影响实验结果。可以用ELISA来检测的样品很多，根据检测项目不同可以是血清、血浆、唾液、尿液等，但大部分还是以血清为样品。
流式细胞术检测细胞表面抗原的步骤
定量细胞浓度 分为2组，一组为实验组，另一组为抗体对照组 两组都先加入非特异性的IgG，封闭可能的Fc受体 按照抗体生产厂家的推荐浓度加入抗体，对照组加入同样荧光标记的非特异性同型抗体。
试剂平衡至室温。准备：消毒台面；穿戴工作服，帽子，口罩和手套，放置棉签，草纸和有盖垃圾桶（内装有消毒剂）。写编号纸并编号。
用100ulPBS重悬，加入10ul大鼠血清封闭，4度避光30min。加入相应的荧光标记的抗体，混匀，避光，4度孵育30min。加入1mlPBS洗两遍。用200ul PBS重悬，经纱布过滤转至流式管，上级检测。
流式可以检测的样本很多：细胞表面的蛋白，通过荧光抗体直接标记；细胞内部的蛋白，细胞固定，通透后再用荧光抗体识别；细胞内部的DNA含量，细胞固定，通透后加DNA染料。
，加入1mlPBS洗两遍（3500rpm，4度，离心）。6，用200ul PBS重悬，经纱布过滤转至流式管，上级检测。这个是正对细胞表面分子，如果检测细胞内分子，需要在加封闭剂之前加入穿膜液。
