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如何自己制备抗体?如何检测抗体的纯度?
多克隆抗体的制备一般包括以下几个步骤:制备抗原。选择实验动物。动物免疫。试取血进行测试,看看是否成功免疫。如果成功免疫,杀死实验动物,采集全部血清。纯化出抗体。鉴定抗体。
早年人工制备抗体的方法主要是以相应抗原免疫动物,获得抗血清。由于抗原常常含有多种不同的抗原表位,加之所获得的抗血清也未经免疫纯化,因此,获得的抗血清实际上是含多种抗体的混合物,即多克隆抗体(polyclonal antibody)。
制备兔源多克隆抗体的主要步骤包括: 准备完全抗原。 对兔子进行免疫。 进行效价检测和终放。 进行抗体亲和纯化。 对抗体进行浓缩和保存。在免疫过程中,需要选择合适的佐剂和抗原,以产生良好的免疫反应。
(1)多克隆抗体的制备。①免疫方法:对多克隆抗体,免疫方法一般有皮下或肌肉免疫法、皮内免疫法、淋巴结免疫法和混合法等。
取兔血有两种方法,一是耳缘静脉或耳动脉放血,一是颈动脉入血,也可心脏采血。取动脉或静脉放血时,将兔放入一个特造的木匣或笼内,耳露于箱(笼)外,也可由另一人捉住兔身。
免疫电泳的影响因素不包括
1、【答案】:E 考点:免疫浊度测定的影响因素。[解析]免疫浊度测定的影响因素包括:抗原与抗体的比例、温度、盐浓度、抗体的质量、增浊剂,以上条件对于免疫浊度测定均有重要影响。
2、免疫比浊测定的影响因素包括:抗原抗体的比例、抗体的质量、抗原抗体反应的缓冲液、增浊剂。
3、带电质点所带电荷。蛋白质由于绥冲液PH的不同,所带的电荷可正可负,在电场里向相反的电极移动。溶液的PH值离等电点越远,则移动的速度越快。蛋白质分子小而带电多者,移动速度较快。分子大而带电少者移动较慢。
4、【答案】:E 免疫固定电泳的应用包括M蛋白的鉴定、尿液中本周蛋白的检测、脑脊液中蛋白的检测和本周蛋白κ、λ分型等。
测抗体纯度的是sdspage和双扩吗
【答案】:C 抗体纯度的鉴定采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、双向免疫扩散试验、免疫电泳等方法。
SDS-PAGE因易于操作,而具有广泛的用途,是许多研究领域的重要的分析技术。
用于分析溶液中抗原和抗体的纯度,分析不同物质相互间扩原性的关系。是一种免疫扩散技术,借凝胶分隔开的两种反应剂(如抗原和抗体)相向扩散,达到平衡时形成沉淀线。