本篇目录:
重组抗体表达案例解析
正常情况下,抗体蛋白的表达量都比较可观,但是某些突变序列产量会偏低,因此我们蛋白交付量跨度较大。一般我们使用还原性和非还原性电泳检测重组抗体,如果客户需要验证抗体的特异性,需提供额外抗原使用WB检测。
首先需要构建平台细胞, 利用模式蛋白(如 GFP 等) 筛选得到宿主细胞基因组中的高表达位点,之后利用 重组酶的特异性, 实现目的基因在该位点的定点整合。
抗原抗体能特异性的结合。如果把基因翻译成的蛋白质注入小鼠,蛋白质就是外来物质是抗原,小鼠会产生针对这种蛋白质的抗体,提取小鼠特异性的抗体就可以用来检测该基因表达的蛋白质。
不是,抗体的产生不是由基因表达完成的。是免疫系统应对外来物质,进行自身调节的产物。而基因的选择性表达是指在细胞分化中,基因在特定的时间和空间条件下有选择表达的现象,其结果是形成了形态结构和生理功能不同的细胞。
病原体侵入人体后,能 够刺激淋巴细胞产生一种抵抗该病原体的特殊蛋白质——抗体。引起人体产生抗体的物质叫做抗原。某种抗体只与刺激它产生的那种抗原结合,促进吞噬细胞吞噬病原体,或使病原体失去致病性。
比如在免疫荧光IF的实验里,同时配合EarthOx的Dylight 549荧光二抗,使用该抗体可以准确的定位出Flag融合表达蛋白在细胞内的位置(如图红色显示部分)。
如何看免疫沉淀的结果图?
分清Input和IP,再者就看用什么抗体IP。Input样品中有A和B蛋白,如果用A蛋白的抗体IP,A蛋白可以富集,在IP的样品中若同样可以检测到B蛋白的存在,说明A和B蛋白互作。
最重要的就是剩下的IP图了,IP图一般都有两个,一个用来说明沉淀下来了蛋白1,另一个图用来说明沉淀下来了与蛋白1存在相互作用的蛋白2。
再看第二部分WB的图,WB的图就是使用含有FLAG抗体的珠子拉下来的蛋白做的,使用拉下来的这些蛋白再做WB,它的原理前面已经描述过了。
可以使用荧光染色或银染色技术等方式对电泳图进行染色,然后计算浓度并分析每个带的大小、形状、位置等信息,以了解共沉淀蛋白的数量和性质。
如何快速了解新接触的质粒(六)
第一步肯定是要确定你融合标签的目的,蛋白纯化首选His-Tag,WB优先选Flag-Tag。 其次蛋白标签对目的蛋白的影响:标签可能会干扰蛋白的正确折叠,因此需要考虑添加的标签是否对目的蛋白的表达有影响。
克隆方法的选择取决于质粒的结构,常见的质粒类型有: 克隆质粒、表达质粒、基因敲除质粒、报告质粒、病毒质粒、基因组工程质粒 等等。而如何选择质粒载体、工具等等相关内容,希望我们能更新到这部分内容。
当两个细胞接触时,它可以从一个细胞跳到另一个细胞中去,也可以被噬菌体带着“走亲戚”。质粒转移到新的细胞,可以使新的细胞具有质粒所控制的特性。