单克隆抗体培养

本篇目录：

（一）脾细胞 1．材料 (1)免疫过的血清抗体滴度高的Balb/c鼠。 (2)1640培养液单克隆抗体制备流程 (3)5％FCS－1640营养液 2．操作方法 (1)拉颈或用CO2处死小白鼠。

小鼠单克隆抗体的制备通常涉及以下流程步骤：免疫小鼠：选择一种目标抗原，并将其注射到小鼠体内，以刺激其免疫系统产生特异性抗体。通常会在一定时间间隔内多次免疫小鼠。

过程 1）免疫脾细胞的制备制备单克隆抗体的动物多采用纯系 Balb/c小鼠。免疫的方法取决于所用抗原的性质。免疫方法同一般血清的制备，也可采用脾内直接免疫法。

杂交瘤技术制备单克隆抗体的主要步骤。(1)抗原制备。(2)免疫动物。(3)免疫脾细胞和骨髓瘤细胞的制备。(4)细胞融合。(5)杂交瘤细胞的选择培养。(6)杂交瘤细胞的筛选。(7)杂交瘤细胞的克隆化。

单克隆抗体的制备过程中，首先要给实验动物注射抗原，以获取相应的B淋巴细胞。将B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合，再用特定的选择性培养基进行筛选，以获得杂交瘤细胞。

进行体内或体外培养。体内培养就是将杂交瘤细胞注入实验动物腹腔，将来从腹水中提取。

第一种方法是：增量培养法，即将杂交瘤细胞在体外培养，在培养液中分离单克隆抗体。该法需用特殊的仪器设备，一般应用无血清培养基，以利于单克隆抗体的浓缩和纯化。第二种也是最普遍采用的方法是小鼠腹腔接种法。

可见该法操作简便、经济，不过，腹水中常混有小鼠的各种杂蛋白（包括Ig），因此在很多情况下要提纯后才能使用，而且还有污染动物病毒的危险，故而最好用SPF级小鼠。

杂交瘤细胞接种于小鼠腹腔内，在小鼠腹腔内生长杂交瘤，并产生腹水，因而可得到大量的腹水单抗且抗体浓度很高。体内培养，腹水中抗体含量浓度高，产量大，可持续抽取，不需要培养基等成本，不需要重复无菌操作，快速简便。

进行体内或体外培养。体内培养就是将杂交瘤细胞注入实验动物腹腔，将来从腹水中提取。

但是，一旦成功，就直接抽取腹水，提取单克隆抗体，这样，算是比较容易。体外培养，不设计免疫排斥反应问题，只需要把杂交瘤细胞所需的营养和外界条件设置好，就可以实现增殖了。相对比较容易。

1、第一种方法是：增量培养法，即将杂交瘤细胞在体外培养，在培养液中分离单克隆抗体。该法需用特殊的仪器设备，一般应用无血清培养基，以利于单克隆抗体的浓缩和纯化。第二种也是最普遍采用的方法是小鼠腹腔接种法。

2、（1）体外使用旋转培养管大量培养杂交瘤细胞，从一清液中获取单克隆抗体。但此方法产量低，一般培养液内抗体含量为10～60μg/ml，如果大量生产，费用较高。（2）体内接种杂交瘤细胞，制备腹水或血清。

3、但是，一旦成功，就直接抽取腹水，提取单克隆抗体，这样，算是比较容易。体外培养，不设计免疫排斥反应问题，只需要把杂交瘤细胞所需的营养和外界条件设置好，就可以实现增殖了。相对比较容易。

两两融合的B淋巴细胞虽然能产生抗体短时间内不死亡，但是它无法再继续增殖了，所以经过正常的衰老，等到细胞达到了一定寿命仍然会正常死亡，细胞最后还是不能在选择培养基上继续生存，所以最终留下来的只有杂交瘤细胞。

单克隆抗体是由杂交瘤细胞产生的，杂交瘤细胞由骨髓瘤细胞和效应B细胞融合而成。

此外，还有瘤B融合但是不会产生符合要求的抗体的融合细胞。

（1）体外使用旋转培养管大量培养杂交瘤细胞，从一清液中获取单克隆抗体。但此方法产量低，一般培养液内抗体含量为10～60μg/ml，如果大量生产，费用较高。（2）体内接种杂交瘤细胞，制备腹水或血清。

单克隆抗体的大量制备主要采用动物体内诱生法和体外培养法。(1)体内诱生法取BALB/c小鼠，首先腹腔注射0.5ml液体石蜡或降植烷进行预处理。1-2周后，腹腔内接种杂交瘤细胞。

单抗的大规模制备目前大量制备单抗的方法主要有两大系统，一是动物体内生产法，这是国内外实验室所广泛采用；另一是体外培养法。

杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化采用灵敏、快速、特异的免疫学方法，筛选出能产生所需单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞，并进行克隆扩增；单克隆抗体的大量制备单克隆抗体的大量制备一般采用动物体内诱生法和体外培养法。

单克隆抗体的大量制备单克隆抗体的大量制备主要采用动物体内诱生法和体外培养法。(1)体内诱生法取BALB/c小鼠，首先腹腔注射0.5ml液体石蜡或降植烷进行预处理。1-2周后，腹腔内接种杂交瘤细胞。

它们将会在单抗生产的产业化进程中发挥越来越大的作用总之，最终获取单抗采用体内培养的方法，根本的决定因素是腹水的抗体含量高。然而，两种培养方法，缺一不可。必须依靠体外培养扩增杂交瘤细胞后，再行体内培养。

细胞融合：采用二氧化碳气体处死小鼠，无菌操作取出脾脏，在平皿内挤压研磨，制备脾细胞悬液。将准备好的同系骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合，并加入促融合剂聚乙二醇。