双抗体分离法最重要的优点是

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双抗体夹心法是一种检测技术，其原理是利用抗体与抗原的特异性结合，通过检测反应产物中的荧光信号或化学发光信号，从而判断样本中是否含有目标抗原。

双抗原夹心（1）原理：双抗原夹心法的反应模式与双抗体夹心法类似。用特异性抗原进行包被和标记。有研究表明，双抗原夹心法检测抗体的灵敏度和准确性要抗体检测使用的间接法（检测抗体更为常用的一种方法）。

原理 LISA 的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。受检标本与固相载体表面的抗原或抗体起反应。

由于反应系统中固相抗体和酶标抗体的量相对于待检抗原是过量的，因此复合物的形成量与待检抗原的含量成正比，测定复合物中酶作用于加入的底物后生成的有色物质量，即可确定待检抗原含量。

【答案】：B 双抗体夹心法的原理是利用连接于固相载体上的抗体（未标记）和酶标抗体可分别与样品中被检测抗原分子上2个不同抗原表位结合，形成固相抗体和酶标抗体免疫复合物。

如果已经是液体，只是需要稀释做实验的话，一般会用封闭液（BSA溶液，脱脂奶粉，注脱脂奶粉稀释后的抗体无法再次使用），或者是洗液（TBST或PBST）。

方法二用于检测未知抗体的间接法：用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg／ml，每孔加0.1ml，4℃过夜。次日洗涤3次。↓ 加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时，洗涤。

(2)单抗包被-抗原-二抗-酶标二抗-底物显色。(改良双抗体夹心法)本法首先是将特异性抗体a包被于固相载体，经洗涤加入含有欲测抗原之待检样品。

PBS稀释。当然最好用封闭液直接稀释，再加一点TritonX100效果好。培养液成分太多了。而且固定之后细胞都死了，用培养液没什么意义，只要保证其pH等条件适合就好了。抗体说明书上都会有推荐的稀释倍数。

WB一抗二抗是乙肝病毒感染的免疫学检测方法。WB是Western Blotting的缩写，即蛋白印迹技术，可以检测人体内是否存在抗乙肝病毒的抗体。一抗是指检测乙肝表面抗原（HBsAg）的抗体，二抗是指检测乙肝表面抗体（HBsAb）的抗体。

1、在RIA反应中，标记抗原和特异性抗体的含量极微，形成的结合态标记抗原(B)不能自行沉淀，因此需用一种合适的沉淀剂使它彻底沉淀，以完成与游离标记抗原(F)的分离。另外对小分子量的抗原也可采取吸附法使B与F分离。

2、①第二抗体沉淀法：又称双抗体法，在受检抗原与第一抗体特异性反应后加入相应的第二抗体，使形成的抗原第一抗体第二抗体的复合物共沉，一经离心即可使结合标记抗原B与游离抗原F分离。本法是特异性沉淀，分离完全，非特异性结合力低。

3、亲和层析是一种非常有效的大规模纯化生物技术产品的分级分离技术并已广泛应用于蛋白质组学和其他领域的研究。尽管其具有很大潜力，但针对每个目标是否能得到适当的配体，亲和层析方法的利用是受到限制的。

1、【答案】：D 采用液相放射免疫分析法要进行分离，分离方法有吸附法、化学沉淀法、双抗体法和PR试剂法。理想的分离技术应符合简便、分离完全、试剂稳定、价格低廉、不受外界干扰、适合自动化分析要求。

2、【答案】：D 放射免疫分析中分离结合与游离标记物的方法主要包括第二抗体沉淀法、PEG（聚乙二醇）沉淀法、PR试剂法、活性炭吸附法。

3、正确答案：D 解析：RIA免疫复合物的放射强度代表标记抗原与抗体结合的量，与待测抗原含量成反比。

4、【答案】：B B为免疫放射分析(IRMA)技术，其余选项均为RIA技术。

5、我的描述： (二)阅读下列两个选段，完成10～15题。(14分)(甲)小草偷偷地从土里钻出来，嫩嫩的，绿绿的。园子里，田野里，瞧去，一大片一大片满是的。坐着，躺着，打两个滚，踢几脚球，赛几趟跑，捉几回迷藏。

终止液是2mol/L的H2SO4，将酶破坏，蛋白变性，从而改变颜色：由蓝变黄。

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠神经肽Y（NPY）水平。

1、【答案】：①在试管内加入特异抗体(Ab)和待测样品(待测物Ag或标准抗原Ag)，给予一定的时间使抗原抗体反应。②加入标记抗原(*Ag)，给予充分的时间使抗原抗体反应。血清样品或标准品中的Ag能抑制*Ag与Ab的结合。

2、当抗原遇到相应的抗体便形成抗原抗体复合物(Ag+Ab 62Ag -Ab)，当用放射性同位素标记抗原再与相应的抗体结合便形成标记抗原和抗体复合物。即： *Ag+Ab62 *Ag-Ab。

3、标记125I的方法可分两大类，即直接标记法和间接标记法。直接标记法是将125I直接结合于蛋白质侧链残基的酪氨酸上。

4、（2）固相法：将抗原或抗体吸附到固相载体表面，然后加待检标本，最后加标记抗体。测定固相载体的放射活性，常用的固相载体有溴化氰（CNBr）海豹化的纸片或聚苯乙烯小管。