本篇目录:
- 1、ipigg出现目的
- 2、ip中有那种杂不出轻重链的二抗吗
- 3、兔源的HA多抗可以做co-ip吗?是不是没有单抗好?还有,我IP用兔源的,wes...
- 4、co-ip抗体的量
- 5、免疫共沉淀
- 6、co-ip实验ip的蛋白都很少怎么办
ipigg出现目的
1、原因可能是没洗干净,如果是这个原因,随便再用几种其它抗体,也能检测到类似条带。
2、过程中,我们也欣喜地看到,这个五年常青的IP,其影响力已逐渐拓展到了更广泛的圈层。
ip中有那种杂不出轻重链的二抗吗
另一种是在IP和WB实验中使用相同的抗体,如果目的条带在55kDa左右,可以通过选择与轻链特异性结合的二抗,来消除重链条带对目的蛋白检测的干扰。
理论上用不同源的抗体可以解决你的问题,因为二抗只认识一抗的来源。但实际上有时候抗体的非特异性结合比较多,你说的这个方法有可能不奏效,但是非常值得一试。
兔源的HA多抗可以做co-ip吗?是不是没有单抗好?还有,我IP用兔源的,wes...
1、一般来说,单抗自然好些,单抗是指用一个细胞扩增后生产的抗体,抗体为单一抗体且特异性高。而多抗是用一群细胞来生产的抗体,抗体种类多,且特异性不一,平均特异性不如单抗。
co-ip抗体的量
co-ip可以定量。根据查询相关资料得知,Co-IP(免疫共沉淀,co-inmunoprecipitation)是经典的利用抗体从样品中捕获靶蛋白及其互作蛋白、复合体的一项技术,能够特异性富集所研究的目的蛋白。
免疫共沉淀(CO-IP)实验是研究蛋白质相互作用的方法,通过选择合适的抗体,来偶联目标蛋白及其交互蛋白,并将它们从细胞或组织中共同沉淀出来。CO-IP实验通常会得到一张包含多个蛋白带的蛋白质电泳图。
检测已沉淀的交互蛋白:可以利用Western blot、ELISA等技术对沉淀下来的蛋白质进行定性和定量分析,来鉴定其中的交互蛋白,并观察其表达量、大小和含量等信息。
无法准确的确定。CO-IP用于纯化与一个已知蛋白质特异性相互作用的其他蛋白质。这个技术通常用于检测蛋白质相互作用,因此无法准确回答 CO-IP 能够拉下多少蛋白量的问题。
例如蛋白A在细胞内的蛋白量不同,或者有着不同的翻译后修饰,这是可以用A蛋白的抗体+prorein A beads来IP,从细胞中把A拉下,再用特异的抗体(如磷酸化,泛素化抗体)来检测A的变化。
免疫共沉淀
免疫共沉淀Co-IP实验是一种通用的蛋白质相互作用研究方法,常用来鉴定两个或多个蛋白质之间可能存在的相互作用关系。
免疫共沉淀:将裂解后的细胞提取物与特异性circRNA抗体预先结合,形成免疫复合物。
例如,针对单纯的免疫沉淀而非免疫共沉淀实验或者虽然是进行免疫共沉淀实验,但蛋白质之间的结合比较牢靠,可以考虑使用低浓度(0.2-0.5%)的SDS洗涤抗体-agarose beads复合物,这样可以去除绝大部分非特异性相互作用。
免疫共沉淀是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。
免疫共沉淀基于抗原抗体特异性结合的原理,体外验证两种分子之间是否存在相互作用的技术。它是免疫沉淀的延伸。基本原理是在含有已知抗原的细胞裂解液中,将已知抗原作为靶蛋白,检测裂解液中可能存在与之有相互作用的蛋白。
免疫共沉淀定义:免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。
co-ip实验ip的蛋白都很少怎么办
1、IP是在已知一种蛋白质的抗体情况下,直接用这种抗体将目标蛋白质提取出来,是一种提纯蛋白质的方法。
2、可以使用荧光染色或银染色技术等方式对电泳图进行染色,然后计算浓度并分析每个带的大小、形状、位置等信息,以了解共沉淀蛋白的数量和性质。
3、无法准确的确定。CO-IP用于纯化与一个已知蛋白质特异性相互作用的其他蛋白质。这个技术通常用于检测蛋白质相互作用,因此无法准确回答 CO-IP 能够拉下多少蛋白量的问题。
4、细胞裂解:首先需要将细胞或组织裂解释放内部蛋白质,使目标蛋白质能够被识别。抗体偶联:接着需要将一个已知与目标蛋白质相互作用的特定抗体或蛋白A/G浸润到裂解产物中,以便定向提取相互作用的蛋白质。