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一抗二抗洗脱液洗多久
一抗回收液使用方法如下：将膜充分浸泡于适当体积的WesternBlot一抗二抗洗脱液中，室温摇床洗脱10-20分钟，时间长短请参考后面的说明进行优化，部分抗体的洗脱可能需较长时间，更有60分钟之久。
在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。(简称洗涤，下同)。 5%脱脂乳（SMP）或者BSA 37℃（或者RT封闭）封闭1小时。
可以。二抗的实质是一种蛋白，和一抗一样，也是属于抗体，二抗洗完可以留着第二天曝光， 一般二抗是可以重复使用的，当然保存条件要负20度以下，但次数不要太多，否则效价会降低，结果不准确。
在4°C的条件下，孵育18-24小时左右。如果一抗的浓度过高或者是孵育时间过长，会导致非特异性吸附，增加洗涤的难度，最终因洗涤不彻底而出现非特性显色。
孵育完二抗后需要清洗，以去除未结合的二抗分子，减少背景信号。清洗时需要保证抗体与抗原结合稳定，同时避免过度清洗，否则会导致信号减弱。建议清洗步骤参考染料商提供的方案。
western中洗脱剂洗脱后为什么要重新封闭
1、所以还是要看你再生的方式是不是剧烈。如果剧烈就封闭一下，否则就达不到再生本来就是为了省事儿的目的了。
2、转膜后，膜上其他的空白位置需要用封闭液封闭。Western的灵敏度某种程度上受限于封闭做的好不好。
3、对已沉积于凝胶床表面的不溶物可把表层凝胶曲调，在适当增补一些新的溶涨胶，并运行重新平衡处理；如果整个柱有微量污染，可用0.5molNaCl溶液洗脱。在通常情况下，一根凝胶柱可使用半年之久。
4、western blot 一抗孵育4小时当然有影响的，一抗孵育时间太长容易导致非特异性吸附加深 一般可以室温孵育三十分，然后四度过夜。或者选择室温孵育2小时直接二抗。因为洗膜洗去的是未结合的抗体，抗体结合上就不容易洗掉了。
5、这个是强清洗剂，洗得多了会洗掉蛋白，不过估计条带会浅但是应该还有吧，你先做出来看看，要是条带只是浅了但是大家都浅啊，组间比较有差异不就行了。
6、它们都是吡咯衍生物与金属镁的络合物，是植物进行光合作用所必需的催化剂。植物中叶绿素a的含量通常是b的3 倍。尽管叶绿素分子中含有一些极性基团，但大的烃基结构使它易溶于醚、石油醚等一些非极性的溶剂。
wb一抗孵错了怎么办
1、发现孵育错误，可以重新孵育以获得更准确的结果。荧光一抗需要在特定的温度和时间下孵育，以确保其与目标蛋白充分结合。如果孵育时间或温度不正确，会导致荧光一抗与目标蛋白的结合不充分，从而影响实验结果。
2、在曝光之前，确保已经完成了所有的孵育和显影步骤。 在曝光之后，如果想要重新孵育二抗，需要先清除一抗。这可以通过用TBS-T或PBS-T洗涤膜来完成。 清除一抗后，可以重新孵育二抗。
3、WB孵二抗孵错了，可以尝试重新孵育，但需要遵循正确的操作规程。- 首先，确保孵育液的纯度和质量符合要求。如果孵育液中存在杂质或污染，可能会导致抗体纯度下降，影响实验结果。- 其次，确保孵育温度和时间符合要求。
4、wb实验一抗孵育的时候放到冷冻了解决方法如下：重新制备一抗、检测一抗的活性、恢复温度。重新制备一抗：如果实验条件允许，可以重新制备一抗，并用新制备的一抗进行实验。
5、显色后，转移之后封闭一小时，随后在4℃下进行过夜一抗孵育重新孵育一抗。转移之后封闭一小时，随后在4℃下进行过夜一抗孵育。此处(B，C)所示为抗体性能的两个实例，4℃过夜孵育，或室温条件下2小时孵育。
6、wb孵二抗，孵错了可以重孵的，用TBST充分洗一下，影响不会太大。如果种属相近有概率会反应，但是也没关系。如果种属不一样，洗掉重新加就好了。wb孵二抗应该孵育1至2小时或在四摄氏度下过夜。
