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免疫组化中一抗与二抗有什么要求?谢谢!
1、比如一抗是鼠抗人,二抗必须是×抗鼠的。×表示可以是羊,兔,马等。一抗是单抗,二抗是多抗,是抗一类同种异型的Ig,带有特殊的可产生发光现象的标记。
2、一抗是针对抗原的抗体,二抗是针对一抗的抗体。即抗体也可以充当抗原刺激机体产生抗体。第一抗体就是平常所说的抗体,即能和抗原特异性结合。第二抗体是能和抗体结合的,即抗体的抗体。主要用于检测抗体的存在。
3、具体条件还要摸索。二抗一般室温或37度30min-1h,浓度一般有工作液,若是浓缩液还要摸索浓度。
4、如果一抗为多克隆抗体,由于多克隆抗体主要是IgG类,因此相应的二抗应该选择抗IgG抗体。
5、一抗是与底物相结合的,同时一抗必须有抗原识别位点,能被另一种抗体识别并结合。二抗是能与一抗的抗原识别位点识别并结合,同时,二抗必须有可以观测、计量的性质。
国外期刊认可国产wb抗体吗
WB一抗二抗是乙肝病毒感染的免疫学检测方法。WB是Western Blotting的缩写,即蛋白印迹技术,可以检测人体内是否存在抗乙肝病毒的抗体。一抗是指检测乙肝表面抗原(HBsAg)的抗体,二抗是指检测乙肝表面抗体(HBsAb)的抗体。
如何正确的选择WB检测抗体WB免疫印迹法,也称免疫转移技术IBT(Immunoblotting),是Towbin将1975年Southern发明的Soutnernblotting技术应用于蛋白-蛋白相互作用建立的免疫学检测方法。
买抗体之前,需要了解该抗体的应用范围,即查看说明书,上面写明了WB、IP,那就是既可以做WB也可以做IP,如果只写了WB,那就不能做IP。
wb实验中一抗和二抗的作用如下:二抗都是重复利用的。一般都是使用3次左右(时间不超过5天);做GAPDH时,二抗甚至经常使用5-7次,效果无影响。
有人用过abcam的抗体做western吗
1、虽然没有具体用过检测这个抗原的抗体,但是如果希望抗体特异性好点,能检测丰度低的蛋白,还是选Abcam吧,Santa有时候全凭人品了,内参抗体什么的还能凑活,其他的比较勉强。
2、常用的抗体公司一般有Santa cruz,sigma,abcam。可以比较一下各公司的抗体浓度,来源,单抗还是多抗,是否纯化,等等。 个人觉得,抗体浓度高的比较好,经过纯化的多抗比较好。还可以查一下文献里都用什么。
3、主要品牌:Abcam(质量稳定,价格比较贵)、CST(质量稳定,价格适中,但是产品线不全)、Santa Cruz(产品新,全,价格便宜。但是质量不稳定)ELISA试剂盒(昊航科贸0531-88930318)转膜:常用的有PVDF膜和NC(硝酸纤维素)膜。
4、用于western的抗体和用于ELISA的抗体,一 般来说用于western的抗体识别的是氨基酸序列特异性;而可用于ELISA的抗体则要看抗原种类,有些是识别氨基酸序列特异性,有些是识别构像特异性。所以一-般根据抗体说明书来确定。
5、都有介绍的,看看图片效果怎么样。多找出一些文献,然后根据你掌握的信息选择一种最便宜,最高效,特异性最好的抗体。一般做科研的人都是这么选择抗体的,不能蒙着买,毕竟不便宜的。