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单克隆抗体的纯化技术操作步骤?
1、（5）装入透析袋于Tris－HCl缓冲液（20mMol/LNaCl）中透析除盐。（6）离心去沉淀。
2、以下是几个常用的基于渐进式纯化的单克隆抗体提纯方法：亲和层析：利用抗体特异性识别作用分离抗体。通常会使用吸附剂，例如蛋白A、蛋白G或蛋白L等针对抗体常见的重、轻链、Fc区等部位进行亲和层析。
3、抗体制备有两种方法。一是增量培养法，即将杂交瘤细胞在体外培养，在培养液中分离单克隆抗体。该法需用特殊的仪器设备，一般应用无血清培养基，以利于单克隆抗体的浓缩和纯化。最普遍采用的是小鼠腹腔接种法。
4、筛选：通过将杂交瘤细胞置于选择性培养基中，筛选出能够产生特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞。扩增：将筛选出的单克隆抗体杂交瘤细胞扩增并收集其上清液。纯化：利用蛋白A/G亲和层析等技术对单克隆抗体进行纯化和富集。
5、（一）脾细胞 1．材料 (1)免疫过的血清抗体滴度高的Balb/c鼠。 (2)1640培养液 单克隆抗体制备流程 (3)5％FCS－1640营养液 2．操作方法 (1)拉颈或用CO2处死小白鼠。
兔抗血清的纯化方法?
② 免疫双扩散法，这是最常用的试血方法，其具体方法是，中间孔加稀释的抗原(1mg/ml)10μl，周围孔顺时针方向加制备的抗血清分别为1：2， 1：4， 1：8，1：16，1：32和1：64，(用生理盐水或PBS稀释)。
混合免疫法的优点是抗原用量小，产生抗体速度快。②多克隆抗体的制备：将抗原免疫动物（常用的动物为兔、羊、狗等），分离出抗血清并纯化抗体。
动物血采集后，立即分离出血清，此免疫血清在保存或应用前，必须作效价和特异性鉴定。
透析法：该方法基于抗体分子的大小差异，利用半透膜对混合样品进行透析纯化。用透析袋将混合样品置于内部，然后使用缓冲液进行透析，根据抗体的分子量，经过透析后，抗体分离出来。
（1）电镜检查：将新鲜病兔尸体或采病死兔肝、脾、肾和淋巴结等材料制成10%悬浊液，应用超声波处理，经差速离心或密度梯度离心纯化后，制备电镜标本，用2%磷钨酸染色，电镜观察。若检出本病毒，可初步确诊。
盐析法提取纯化抗体的影响因素有哪些
主要的影响因素有：蛋白质的浓度，蛋白质浓度愈高，所需盐的饱和度极限愈低，但杂蛋白的共沉作用也随之增加，从而影响蛋白质的纯化。离子强度，也就是盐浓度，例如当硫酸铵饱和度不同，析出的成分就不同。
盐析现象。(二)酸碱度 蛋白质具有两性电离性质，因此每种蛋白质都有固定的等电点。抗原抗体 反应必须在合适的 pH 环境中进行，pH 过高或过低都将影响抗原与抗体的理 化性质。抗原抗体反应一般在 pH 为 6～9 进行。
（一）反应物自身的因素抗体：不同来源的抗体，反应性各有差异，抗体的浓度、特异性和亲和力都影响抗体抗原反应，为提高试验的可靠性，应选择高特异性、高亲和力的抗体作诊断试剂。
提取物中超氧化物歧化酶（SOD）活性受多种因素影响。以下是一些可能影响SOD活性的关键因素： 提取溶剂：提取溶剂的选择对SOD活性至关重要。溶剂的极性、酸碱性等特性可能影响SOD的稳定性和活性。
辛酸-硫酸铵两步纯化法；含脂类抗体可影响实验结果。
蛋白分离纯化方法有哪些
常见的蛋白分离纯化方法：盐析法、盐析法、离子交换层析法、亲和层析法、凝胶电泳法、高效液相色谱法。盐析法：利用不同蛋白质对盐浓度的敏感性差异，通过逐渐加入盐类使蛋白质沉淀析出，再通过离心去除沉淀物。
分离和提纯蛋白质的方法有盐析法、离子交换法、凝胶色谱法。盐析法：盐析法是一种常用的蛋白质分离方法，原理是向蛋白质溶液中加入高浓度的盐溶液，使蛋白质的溶解度降低，从而从溶液中析出。
【答案】：蛋白质分离纯化的主要方法：①盐析 根据性质：蛋白质的沉淀。作用机制：中性盐中和表面电荷，破坏水化层。影响因素：表面电荷、水化层、溶剂性质。②电泳 根据性质：蛋白质的两性解离。
电泳：在克隆基因表达产物的检测分析过程中，电泳是常用的方法，但在纯化蛋白时，通常都不采用电泳的方法。
