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免疫荧光标记为什么不直接标记一抗而标记二抗?
二抗能起到信号放大的作用,如果仅仅依赖一抗,可能抗体需要量以及光亮强度都会受局限。即,一抗负责准确识别靶标分子,二抗负责信号放大。
所以,直接标记1抗的出来的结果是不准确的,而标记2抗是相对于1抗直接标记来说更准确的,所以经过大量的实验之后人们抛弃了直接标1抗的方法。
一抗:可以特异结合底物,就是识别出我们想要检测的东西.一抗和底物结合与否用肉眼是看不出来的。二抗:可以和一抗结合,并带有可以被检测出的标记(如带荧光、放射性、化学发光或显色基团),作用是检测一抗。
直接把荧光基团连接在一抗上确实是可以的,但是难就难在抗体与荧光基团的连接,每换一种抗体,就需要重新连接一次,这不仅麻烦,成本也就高了。
之所以用二抗,是因为二抗是带有酶标的抗体,它跟一抗结合之后可以曝光显影。如果你的一抗上面直接带有酶标物,那可以不用二抗直接曝光。但是一般你的一抗都是少数应用的,厂家不会大批量生产,就不会费劲给它加酶标。
接免疫荧光和间接免疫荧光染色方法的不同:直接免疫荧光的实验方案通常较短,因为它只需要一个标记步骤。间接免疫荧光使用偶联二抗检测一抗会增加额外的操作步骤。直接免疫荧光方法的实验方案步骤较少,更简单。
直接免疫荧光技术用于
1、间接免疫荧光抗体技术标记抗体,可用已知抗原检测第一抗体,同时也可用已知第一抗体检测未知抗原。分别用两种荧光素标记两种第一抗体,可同时检测两种抗原。直接法将荧光素标记在第一抗体分子上,只能检测抗原分子。
2、间接法可用于检测抗原和抗体。本法有两种抗体相继作用,第一抗体为针对抗原的特异抗体,第二抗体(荧光抗体)为针对第一抗体的抗抗体。本法灵敏度高,而且在不同抗原的检测中只需应用一种荧光抗体。因此本题正确答案是A。
3、免疫荧光技术是将荧光素如异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)与相应抗体(或抗原)以化学的方法结合,将荧光标记抗体(或抗原)与标本中相应的抗原结合形成荧光标记的抗体- 抗原复合物,用荧光显微镜观察。
4、是一种用于测量含量很低的生物活性化合物的仪器。免疫荧光技术简介:是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。
5、在细菌诊断中 免疫荧光技术在这里主要是用于对细菌和抗原结构的研究,例如甲型链球菌,能够利用这项技术做出快速的分析和判断。
6、免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上,与其相应的抗原(或抗体)结合后,在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。
什么是直接免疫荧光法和间接免疫荧光法
1、用于检测或定位各种抗原,也可以与其他蛋白质结合,用于检测或定位抗体。 用免疫荧光技术显示和检查细胞或组织内抗原或半抗原物质等方法称为免疫荧光细胞(或组织)化学技术。原理:免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。
2、这是一种免疫检测技术;免疫萤光法首先将将萤光物质标记在抗原(或抗体)上,通过免疫反应检测抗体(或抗原),如果二者对应,形成带有萤光物质的免疫复合物不被水冲掉,在萤光显微镜下可见萤光。
3、(1)直接法:①优点:操作简便、特异性强、非特异性荧光干扰因素少;②缺点:敏感性偏低,每检查一种抗原需制备相应的特异荧光抗体。
4、直接法是将荧光素标记的特异性抗体直接与相应的抗原结合,以检查出相应的抗原成分。
直接免疫荧光检查可见天疱疮荧光抗体出现在
(2)直接免疫荧光检查:取水疱或其周围皮肤作冰冻切片,可见棘细胞间有免疫球蛋白和补体沉积。(3)间接免疫荧光检查:取患者血清检测天疱疮抗体,其滴度与病情呈正相关。(4)出现血浆总蛋白降低和不同程度贫血。
. 天疱疮抗体是天疱疮发病的关键因素 在天疱疮病人中,直接免疫荧光检查发现,活动期患者几乎100%在皮损周围可检测到天疱疮抗体沉积于皮肤,抗体主要类型为IgG,偶有IgA和IgM。
示表皮棘细胞间荧光,系IgG和(或)C3沉积所致。取病情活动患者血清作间接免疫荧光检查,可检出天疱疮抗体。天疱疮主要分为寻常性天疱疮、增殖性天疱疮、落叶性天疱疮和红斑性天疱疮。