单克隆抗体培养液要多少可以打小鼠

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液体培养基在细胞工程和备胎工程中较常见细胞工程中的动物细胞培养是液体的（其中含有血清）胚胎工程中精子获能用的肝素和钙离子载体A23187都是液体的早期胚胎培养的发育培养基也是液体的。

技术手段不同，植物细胞工程的手段有植物组织培养、植物体细胞杂交等，动物细胞工程的手段有动物细胞培养、动物细胞融合、单克隆抗体、核移植、胚胎移植、胚胎分割等。

采用无血清培养基培养杂交瘤细胞制备单克隆抗体，便于抗体纯化，有利于规模化、标准化生产，同时降低细胞污染的概率。但无血清培养的细胞新陈代谢较弱，同时无血清培养基缺乏血清中保护细胞免受环境机械损伤的细胞因子等。

单抗技术是主要由抗原制备，免疫动物，细胞融合，筛选杂交瘤细胞，克隆化培养，单克隆抗体的大量制备与鉴定等一系列实验组成的实验系统，其核心部分是细胞融合。

方法：通常采用流式细胞术（流式细胞仪）或细胞融合技术进行终次筛选。目的：终次筛选的目的是进一步筛选出具有更高亲和力和特异性的单克隆抗体。

选择性培养：选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细胞，一般采用HAT选择性培养基。

融合：将小鼠脾细胞与肿瘤细胞（如SP2/0或NS0细胞）融合，形成杂交瘤细胞。筛选：通过将杂交瘤细胞置于选择性培养基中，筛选出能够产生特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞。

）免疫脾细胞的制备制备单克隆抗体的动物多采用纯系 Balb/c小鼠。免疫的方法取决于所用抗原的性质。免疫方法同一般血清的制备，也可采用脾内直接免疫法。

单克隆抗体(MAb)：是针专一的抗原决定簇产生的抗体，单克隆技术又名杂交瘤技术，起源于1975年，由G.Khler和Milstein创立。主要原理是利用产生抗体的B细胞与肿瘤细胞杂交融合成杂交瘤细胞，生产抗体。

进行体内或体外培养。体内培养就是将杂交瘤细胞注入实验动物腹腔，将来从腹水中提取。

(7)杂交瘤细胞的克隆化。(8)单克隆抗体的检定。(9)分泌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立。(10)单克隆抗体的大量制备。

单克隆抗体是由杂交瘤细胞产生的，杂交瘤细胞由骨髓瘤细胞和效应B细胞融合而成。

1、细胞融合：采用二氧化碳气体处死小鼠，无菌操作取出脾脏，在平皿内挤压研磨，制备脾细胞悬液。将准备好的同系骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合，并加入促融合剂聚乙二醇。

2、小鼠单克隆抗体的制备通常涉及以下流程步骤：免疫小鼠：选择一种目标抗原，并将其注射到小鼠体内，以刺激其免疫系统产生特异性抗体。通常会在一定时间间隔内多次免疫小鼠。

3、杂交瘤技术制备单克隆抗体的主要步骤。(1)抗原制备。(2)免疫动物。(3)免疫脾细胞和骨髓瘤细胞的制备。(4)细胞融合。(5)杂交瘤细胞的选择培养。(6)杂交瘤细胞的筛选。(7)杂交瘤细胞的克隆化。

4、过程 1）免疫脾细胞的制备制备单克隆抗体的动物多采用纯系 Balb/c小鼠。免疫的方法取决于所用抗原的性质。免疫方法同一般血清的制备，也可采用脾内直接免疫法。

5、（一）脾细胞 1．材料 (1)免疫过的血清抗体滴度高的Balb/c鼠。 (2)1640培养液单克隆抗体制备流程 (3)5％FCS－1640营养液 2．操作方法 (1)拉颈或用CO2处死小白鼠。

单克隆抗体技术的重大意义在于可以用不纯的抗原分子制备特异性强、纯度高、均一性好的单克隆抗体。单克隆抗体的应用：①医学诊断；②抗原蛋白的提纯；③肿瘤的导向治疗和放射免疫显像技术。

如果能选出一个制造一种专一抗体的细胞进行培养，就可得到由单细胞经分裂增殖而形成细胞群，即单克隆。单克隆细胞将合成一种决定簇的抗体，称为单克隆抗体。

【答案】：基本原理：小鼠骨髓瘤细胞在体外适当条件下可无限增殖，但不能分泌抗体，而抗原免疫小鼠的脾细胞(B细胞)能产生抗体，但不能在体外无限增值。将两种细胞融合和就同时具有了无限增殖和分泌抗体的功能。

所以制备单克隆抗体的技术又称杂交瘤技术(hybredoma technique)。基本原理其原理是：B淋巴细胞能够产生抗体，但在体外不能进行无限分裂；而瘤细胞虽然可以在体外进行无限传代，但不能产生抗体。

第一种方法是：增量培养法，即将杂交瘤细胞在体外培养，在培养液中分离单克隆抗体。该法需用特殊的仪器设备，一般应用无血清培养基，以利于单克隆抗体的浓缩和纯化。第二种也是最普遍采用的方法是小鼠腹腔接种法。

可见该法操作简便、经济，不过，腹水中常混有小鼠的各种杂蛋白（包括Ig），因此在很多情况下要提纯后才能使用，而且还有污染动物病毒的危险，故而最好用SPF级小鼠。

杂交瘤细胞接种于小鼠腹腔内，在小鼠腹腔内生长杂交瘤，并产生腹水，因而可得到大量的腹水单抗且抗体浓度很高。体内培养，腹水中抗体含量浓度高，产量大，可持续抽取，不需要培养基等成本，不需要重复无菌操作，快速简便。