本篇目录：
转基因医疗中常用的载体主要有哪些
1、质粒载体 质粒载体，相对分子质量较小、独立于染色体DNA之外的环状DNA(一般有1～200 kb左右，kb为千碱基对)，有的一个细菌中有一个，有的一个细菌中有多个。
2、在基因工程重组DNA技术中将DNA片段（目的基因）转移至受体细胞的一种能自我复制的DNA分子。三种常用的载体是质粒、λ噬菌体的衍生物和动植物病毒，最常用的是质粒。
3、最常用是质粒，其次是病毒等。载体有复制原点、标记基因、启动子、终止子、目的基因五部分。
4、科学家在培养转基因植物时，常用细菌中的质粒作为载体。解析：细菌属于原核生物，原核生物的细胞质中含有质粒（本质是小型双链环状DNA）。
5、质粒载体、噬菌体载体、黏粒载体、YAC、BAC等等。所有的质粒载体都有三个共同的特征：一个复制子、一个选择性标志和一个克隆位点。
6、载体种类：质粒、噬菌体、腺病毒载体、逆转录病毒载体。质粒特点： 存在于细菌染色体外的小型环状DNA分子，具有自我复制功能，带有抗性基因及表型识别等遗传性标记物，经改造后具有多克隆位点。
抗体表达CHO细胞株构建策略与优化
靶向CHO细胞关键调节基因， 通过基因工程手段改造和驯化产生CHO细胞亚系，使表现出更好的凋亡抗性、 代谢、 糖基化、 蛋白表达、 细胞周期调节、 增殖、 分泌或细胞骨架动力学。
验证细胞稳定性和表达 在细胞筛选和扩展完成后，需要验证构建的细胞稳定性和表达情况。这可以通过多种方法实现，例如荧光染色、Western blotting等。
稳转细胞株构建 选择宿主细胞系：选择能够稳定承载外源基因的细胞系作为宿主细胞。常用的细胞系包括HEK29CHO、HeLa等。构建表达载体：设计和构建包含目标基因的表达载体。
制备去内毒素质粒，瞬时转染二氢叶酸还原酶(dhfr)缺陷型CHO细胞系，纯化少量抗体，检测其特异性及亲和力指数SPR。经客户确认，建立稳转体系，加压筛选获得稳定表达的细胞株。
实验设计 我们分析客户提供的重轻链理论序列，符合理论分子量大小，抗体蛋白也无跨膜等特殊结构，因此我们设计思路为：以客户的基因序列翻译的蛋白序列为源模板，通过密码子优化一套最适宜HEK293T细胞系的基因序列。
在以细胞培养为基础的疫苗、抗体药物生产中，Vero细胞、BHK21细胞、CHO细胞和Marc145细胞是最常用的细胞，这些细胞的反应器大规模培养技术支撑着行业的技术水平[4]。
抗原和抗体利用载体后相结合的称为什么
【答案】：A ELISA是酶联免疫吸附试验的简写，是一种酶标固相免疫测定技术。将抗原或抗体结合在固相载体上的过程称为包被。当包被的蛋白质浓度过低，固相载体表面不能被此蛋白质完全覆盖，需再包被一次消除干扰的过程称为封闭。
ELISA测定中将抗原或抗体与固相载体结合的过程称为包被。
抗体检查抗原的称反向试验，抗原抗体直接结合的称直接反应，抗原和抗体利用载体后相结合的称间接反应。测定血清中的特异性抗体需检查双份血清，恢复期抗体滴度需超过病初滴度4倍才有诊断意义。
【答案】：B 抗原决定簇是指抗原分子中决定抗原特异性的特殊化学基团，又称表位。抗原通过抗原决定簇与相应的抗体结合。
间接法是检测抗体最常用的方法，其原理为利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体，故称为间接法。操作步骤如下： (1)将特异性抗原与固相载体连接，形成固相抗原：洗涤除去未结合的抗原及杂质。
抗原表面与抗体结合的特殊化学基团称为抗原决定簇。
抗体库三种方法的基本原理
1、定向筛选或链替换抗体库技术，是利用噬菌体展示的方法，将鼠源抗体重轻链V区结构域分别顺序或平行地替换为人源化的。该方法为人源化提供了一个强大的工具，可以最大限度地减少人体的免疫原性。
2、亲和层析法原理：利用蛋白质之间的特异性结合(抗原-抗体、受体-配体)将一种配基与凝胶颗粒结合，捕捉与他相配的物质，洗脱另外一种物质，并且洗脱一般用改变pH的方法。
3、（1）多克隆抗体的制备。①免疫方法：对多克隆抗体，免疫方法一般有皮下或肌肉免疫法、皮内免疫法、淋巴结免疫法和混合法等。
4、(1)补体结合试验；华氏反应，基本原理为含有抗体的血清再加入抗原、补体、溶血素之后不会发生裂解。但是不含有抗体的血清再加入一系列物质之后会发生裂解。只加入抗原或者抗体都会不发生裂解。
5、抗原活性，和其他细节；确保抗原蛋白质表达量及其稳定性；调整培养基pH和抗原浓度等条件，以保证抗体的最佳表达。实验原理是通过抗原对抗体进行识别，使免疫反应的凝聚度增加，以达到识别敏感的微小物质的目的。
6、在本次疫情中，我们采用的免疫测定包括了快速抗原检测与抗体检测，它以 抗原-抗体反应 为基本原理，旨在通过抗原与抗体快速的中和效应，以较少的时间成本探测样本中是否存在待测物。两者都属于免疫层析法的范畴。
