抗体纯度分析

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【答案】：C 抗体纯度的鉴定采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）、双向免疫扩散试验、免疫电泳等方法。

SDS-PAGE因易于操作，而具有广泛的用途，是许多研究领域的重要的分析技术。

用于分析溶液中抗原和抗体的纯度，分析不同物质相互间扩原性的关系。是一种免疫扩散技术，借凝胶分隔开的两种反应剂（如抗原和抗体）相向扩散，达到平衡时形成沉淀线。

1、沉淀线靠近抗原孔，则提示抗体含量大；靠近抗体孔，则提示抗原含量较多；不出现沉淀线则表明抗体或抗原的缺乏或抗原过剩；另外，如出现多条沉淀线，则说明抗原和抗体皆不是单一的成分。因此，可用于鉴定抗原或抗体的纯度。

2、沉淀线的形成是根据抗原抗体两者比例所致。沉淀线如靠近抗原孔则指示抗体含量较大，如靠近抗体孔，则指示抗原含量较多。不出现沉淀线则表明抗原或抗体的缺如或者抗原过剩。

3、依据沉淀线的形态、条数、清晰度及位置可了解抗原或抗体的若干性质，如浓度、特异性等。

4、免疫电泳（immune electrophoresis）是将琼脂电泳和双向琼脂扩散结合起来，用于分析抗原组成的一种定性方法。

5、考点：电泳的临床应用。[解析]双向琼脂扩散是将抗原与抗体分别加入琼脂凝胶板上相邻近的小孔内，让它们相互向对方扩散。当两者在最适当比例处相遇时，即形成一条清晰的沉淀线。根据是否出现沉淀线，可对抗血清特异性进行鉴定。

3 R.A.Van.Densen介绍了NI试验的一种改进法-平板微量NI试验，此法虽不能提供常量法的定量，但却是A型流感病毒的病毒分类和抗体检测的快捷方法，试验证明微量NI试验能对分离物做出准确鉴定而常量NI试验检测亚型混合物似更敏感[5]。

（1）禽流感HI抗体检测方法的用途主要分两方面：a、应用标准病毒悬液测定血清中的相应抗体水平b、应用特异性的抗体鉴定新分离的病毒。

主要有血凝试验、血凝抑制试验、琼脂扩散试验、神经氨酸酶抑制试验、酶联免疫吸附试验、病毒中和试验及免疫荧光试验等。其中血凝和血凝抑制试验、琼脂免疫扩散试验是OIE推荐使用的方法。

血清学检查禽流感患者在发病初期和恢复期进行血清检查，如果双份血清抗禽流感病毒抗体滴度有4倍以上升高，有助于回顾性诊断。

还可用RT-PCR法检测禽流感病毒亚型特异性H抗原基因。病毒分离从患者呼吸道标本中（如鼻咽分泌物、口腔含漱液、气管吸出物或呼吸道上皮细胞）分离禽流感病毒。

1、蒸馏法：蒸馏是一种常用的液体有机物纯度检验方法。通过加热液体样品，使其沸腾并冷凝成液体，从而将低沸点和高沸点的化合物分离开来。纯度较高的液体有机物应该具有较窄的沸点范围。

2、质谱：液相-质谱（LC-MS）联用的一种仪器，可以通过积分测其纯度，也可测其分子量，是判断化合物的一种最常见、最基本的检测方法。

3、检查化合物纯度的方法有熔点测定、薄层色谱法、纸色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法。资料扩展：化合物是由两种或两种以上不同元素组成的纯净物（区别于单质）。

根据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体条件，可设计出各种不同类型的检测方法。用于临床检验的ELISA主要有以下几种类型：双抗体夹心法测抗原双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法，因为标准曲线到达高峰后呈钩状弯落。

直接法（directELISA）将抗原直接固定在固相载体上，参加酶符号的一级抗体，即可测定抗原总量，此一级抗体的特异性非常重要。优势：操作手续简略，因无须运用二抗可防止交互反响。

直接法（direct ELISA）将抗原直接固定在固相载体上，加入酶标记的一级抗体，即可测定抗原总量，此一级抗体的特异性非常重要。优势：操作手续简短，因无须使用二抗可避免交互反应。

（一）双抗体夹心法双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法，操作步骤如下：（1）将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体：洗涤除去未结合的抗体及杂质。

类型夹心法常用于检测大分子抗原，将具有专一性的抗体固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体，重复两次，洗去多余未键结二次抗体，加入酶底物使酵素呈色，以肉眼或仪器读取呈色结果。

多克隆抗体的制备一般包括以下几个步骤：制备抗原。选择实验动物。动物免疫。试取血进行测试，看看是否成功免疫。如果成功免疫，杀死实验动物，采集全部血清。纯化出抗体。鉴定抗体。

早年人工制备抗体的方法主要是以相应抗原免疫动物，获得抗血清。由于抗原常常含有多种不同的抗原表位，加之所获得的抗血清也未经免疫纯化，因此，获得的抗血清实际上是含多种抗体的混合物，即多克隆抗体(polyclonal antibody)。

制备兔源多克隆抗体的主要步骤包括：准备完全抗原。对兔子进行免疫。进行效价检测和终放。进行抗体亲和纯化。对抗体进行浓缩和保存。在免疫过程中，需要选择合适的佐剂和抗原，以产生良好的免疫反应。