本篇目录：
流式实验该准备多少管样本?如何设置对照?
空白对照，即不添加任何荧光染料的对照管。 设置空白对照，是为了区分细胞本底的自发荧光，及判断药物处理等外界因素是否会额外引入自发荧光。
流式细胞术实验：制备细胞悬液，计数 分装，按照每个EP（5ml）管1-2*10 6个细胞分装，3500rpm，4度离心。用100ulPBS重悬，加入10ul大鼠血清封闭，4度避光30min。
上机的时候，除了样本以外，需要如下额外的7个管子来调机器： 不加任何抗体的，用来调节FCS和SCC 3个管子，分别加了同型非特异抗体，经过了孵育和洗涤。
可以以任意参数及多个参数的组合作为阈值；大多数样本都可以设定FSC/SSC；阈值以下的信号不存储；可以根据阴性对照管来调节。目的是将不需要的杂质信号，噪音信号，无用的细胞信号等扣除，使收集到的都是有用信号。
fitc荧光标记原理
免疫荧光技术是将荧光素如异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate，FITC)与相应抗体（或抗原）以化学的方法结合，将荧光标记抗体（或抗原）与标本中相应的抗原结合形成荧光标记的抗体- 抗原复合物，用荧光显微镜观察。
荧光是物质吸收光照或者其他电磁辐射后发出的光。大多数情况下，发光波长比吸收波长较长，能量更低。但是当吸收强度较大时，可能发生双光子吸收现象，导致辐射波长短于吸收波长的情况发生。
victoria的水母中发现。其基因所产生的蛋白质，在蓝色波长范围的光线激发下，会发出绿色萤光。这个发光的过程中还需要冷光蛋白质aequorin的帮助，且这个冷光蛋白质与钙离子(ca2+)可产生交互作用。
藻酸盐包被肿瘤细胞模型是目前定量测定肿瘤血管生成的标准方法〔3〕，它的主要原理是将异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖(FITCdextran)注射进入体内后，葡聚糖就会粘附于内皮细胞表面、部分可能被内皮细胞吸收而滞留于血管腔中。
荧光是一种化学物质，原理是在被紫外线进行照射的时候，会形成另一种独特状态，在这种独特状态消失之后，就会恢复成原来的样子，这时候就会发出荧光。
流式图解析
1、流式图：流式仪将接收到的光信号转化为电信号，经计算机转化为数字信号，绘制成图呈现。
2、流式的图一般是两种形式。一是柱状图，X轴是信号强度，Y轴是计数。数据通常显示为峰值。比如阴性或者信号弱的峰在左侧，而阳性或者信号强的就位于右侧。
3、流式图四个象限看凋亡：在二维散点图上，PI 和 annexin V 分别是X和Y轴。一般认为PI单染的细胞是已经死亡的细胞，annexin V 单染的细胞是凋亡早期的细胞，而双染是凋亡中期的。
4、在二维图的中，横坐标/纵坐标都表示荧光信号或散射光信号相对强度的值，可以是线形（line）或者对数（log）。双参数图可以将样品细胞群分开，从而方便对感兴趣的细胞进行分析。
