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【科研】PCR引物设计原则
1、遵循原则如下： 引物长度：引物的最佳长度为24或25个碱基左右。但是如果需要调整Tm值，引物的长度可以控制在21至28个碱基之间。当扩增≥10 kb长片段时，25-35个碱基之间的引物可以提供更好的结果。
2、PCR引物设计的11条黄金法则引物最好在模板cDNA的保守区内设计。DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。遵循原则如下：引物长度：引物的最佳长度为24或25个碱基左右。
3、引物的长度一般为15-30bp，常用的是18-27bp，但不应大于38，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，不适于TaqDNA聚合酶进行反应。
4、引物设计原则：长度： 18~30 bp， 20 bp左右最为常用。引物过短易导致非特异性打增；较长引物特异性强，但退火效率低，且易形成二级结构，从而导致PCR产量少。
5、PCR引物设计的11条黄金法则 引物最好在模板cDNA的保守区内设计。 DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。
6、【科研】PCR引物设计原则引物自身及引物之间不应存在互补序列。引物5′端和中间△G值应该相对较高，而3′端△G值较低。引物的5′端可以修饰，而3′端不可修饰。扩增产物的单链不能形成二级结构。1引物应具有特异性。
免疫PCR的制作方法
1、主要的技术步骤是：（1）DNA变性 加热使靶DNA序列双链解离成单链DNA。（2）引物与靶DNA退火 适当降低温度，使两个引物分别结合成靶DNA两条的3′末端向5′末端延伸。
2、最初Sano等人建立的免疫 -PCR实验流程如下：（1）再包被缓冲液稀释抗原BSSA，并固定在微滴定板上。（2）微滴定板上加入相应的已稀释的单克隆抗体，并洗去未结合的抗体分 子。
3、pcr中引物的作用是作为DNA复制开始时DNA聚合酶的结合位点，在细胞外的条件下，只有通过引物，DNA才可以开始进行复制。PCR的技术的主要步骤：DNA变性：（90℃-96℃）：双链DNA模板在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA。
4、方法 1/4 在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
5、准备PCR产物 进行PCR扩增，使用适当的引物扩增目标DNA或RNA片段。确保PCR反应充分进行，并获得足够数量的PCR产物。净化PCR产物 使用净化试剂盒将PCR产物从反应体系中净化。这将去除引物、缓冲液和其他PCR反应组分。
6、②10XPCR缓冲液(100mmol/ L. Tris-HCL， pH3，500 mmol/L KCL；0.1%明胶；15mmol/LMgCl2)。③目的基因引物 ④高压灭菌牙签 ⑤抗性平板。
pcr中的引物起什么作用?
pcr中引物的作用：找到一对合适的核苷酸片段，使其能有效地扩增模板DNA序列。引物是人工合成的两段寡核苷酸序列，一个引物与目的基因一端的一条DNA模板链互补，另一个引物与目的基因另一端的另一条DNA模板链互补。
引物（Primer）是在分子生物学实验中常用的短片段单链DNA或RNA，通常由15-30个核苷酸组成。引物在实验过程中起到特异性结合目标DNA或RNA模板的作用，并为DNA或RNA聚合酶提供起始位点，从而引导聚合酶进行核酸的合成。
在聚合酶链式反应（PCR）中，引物用于指导DNA的扩增，引物与待扩增的DNA序列的两端互补，使DNA聚合酶能够在引物上开始合成新的DNA链。引物在生物学研究和实验中起着重要的作用。
引物是一段短的单链RNA或DNA片段，可结合在核酸链上与之互补的区域回，其功能是作为核苷酸答聚合作用的起始点，核酸聚合酶可由其3′端开始合成新的核酸链。体外人工设计的引物被广泛用于聚合酶链反应、测序和探针合成等。
引物可以做为DNA复制开始时DNA聚合酶的结合位点，在细胞外的条件下，只有通过引物，DNA才可以开始进行复制。引物是已知序列的DNA小片段。
，这是由DNA聚合酶决定的。DNA聚合酶只能在具有前端片段的情况之下，才能够顺着这个片段合成下去。所以一定要有引物作为DNA聚合酶的引导片断。2。引物结合在DNA的什么位置决定了要扩增的部分。
