内参抗体使用方法-GAPDH内参抗体是一抗

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1、WB一抗二抗是乙肝病毒感染的免疫学检测方法。WB是Western Blotting的缩写，即蛋白印迹技术，可以检测人体内是否存在抗乙肝病毒的抗体。一抗是指检测乙肝表面抗原（HBsAg）的抗体，二抗是指检测乙肝表面抗体（HBsAb）的抗体。

2、WB检测的基本原理不做细述，可根据以下图片脑补一下：WB实验中使用到的有三种抗体：一抗、二抗和内参抗体。

3、特点不同：一抗可以特异结合底物，就是识别出我们想要检测的东西。一抗和底物结合与否用肉眼是看不出来的。二抗可以和一抗结合，并带有可以被检测出的标记（如带荧光、放射性、化学发光或显色基团），作用是检测一抗。

4、但是二抗不一样，二抗可以识别同一物种来源的一抗，成本相对低廉。另外，同位素现在在WB基本没有人用了，同位素半衰期只有14还是15天，就是标记了，半个月标记就没了，不好保存，而且同位素对实验室有要求的。

5、之所以用二抗，是因为二抗是带有酶标的抗体，它跟一抗结合之后可以曝光显影。如果你的一抗上面直接带有酶标物，那可以不用二抗直接曝光。但是一般你的一抗都是少数应用的，厂家不会大批量生产，就不会费劲给它加酶标。

6、作用是检测一抗，提高了通用性。一抗是针对抗原的抗体，二抗是针对一抗的抗体，即抗体也可以充当抗原刺激机体产生抗体。一抗二抗都是一种可以特异结合别的物质的基团，而且一抗可以至少结合两种其他基团（底物和二抗）。

Gapdh内参基因贴抗体是用于检测Gapdh表达量的抗体，通常是由兔、小鼠或大鼠制备的多克隆抗体。

GAPDH是参与糖酵解的一种关键酶，由4个30-40kDa的亚基组成，分子量146kDa，检测条带大约在36kDa。GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达，且GAPDH 作为管家基因在同种细胞或者组织中的蛋白质表达量一般是恒定的。

GAPDH：GAPDH或G3PDH是甘油醛-3-磷酸脱氢酶。B-ACTIN：即“肌动蛋白”，是细胞的一种重要骨架蛋白。分布方式不同：GAPDH：广泛分布于各种组织中的细胞。B-ACTIN：分布在骨架当中。

GAPDH（甘油醛-3-磷酸脱氢酶）是一种参与许多生命活动的酶，在人和鼠中都是相同的。不仅在人类中，而且在其他哺乳动物（如鼠类）中，GAPDH也发挥着类似的作用。

1、GAPDH在人和鼠之间没有明显的区别。GAPDH（甘油醛-3-磷酸脱氢酶）是一种参与许多生命活动的酶，在人和鼠中都是相同的。不仅在人类中，而且在其他哺乳动物（如鼠类）中，GAPDH也发挥着类似的作用。

2、GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达，广泛用作Western blot蛋白质标准化的内参。

3、搞不太清楚你想说什么。内参抗体一般选择 β-actin，GAPDH。hsp90也OK。一般内参抗体都是鼠源的啊。既然一抗是鼠源，二抗是接HRP的羊抗鼠就很好理解啊。

4、内参也分兔抗鼠抗。根据相关公开资料显示，内参是内在参照，在各组织和细胞中表达相对恒定，在检测某些功能蛋白的表达水平变化时用做参照物，内参就分为兔抗鼠抗两种。

内参配制方法：WB操作简单，既可以定性分析表达产物，同时还可以指示目的蛋白量的相对变化。作为一种有活性的生物大分子，抗体和抗原的反应是比较复杂的，因此用来测定表达产物时存在着一定的不确定性。

膜用去离子水稍加漂洗，滤纸贴角吸干，反贴法覆于 A、B 混合液滴上，熄灯至可见淡绿色荧光条带(5min 左右)后滤纸贴角吸干，置于保鲜膜内固定于片盒中，迅速盖上胶片，关闭胶盒，根据所见荧光强度曝光。

配制actin一抗( 公司)，1：2000稀释，加入上述配制的5%牛奶4ml，再加入2ul actin一抗，混匀，现配现用。将PVDF膜从封闭液中取出，可用平头镊子小心放入塑料手套的手指中，加入一抗，封口，使膜完全浸泡在一抗中，放入冰箱，4℃过夜。

今天，早早地过去，就是希望把westernblot的流程完成了。洗膜。1X TBST洗膜，这个我已经提前配置好了，没有压力。5minX3次。孵一抗。按照GAPDH说明书，1：4000稀释一抗。我还以为4ml的一抗稀释液要16ul的抗体。

GAPDH是参与糖酵解的一种关键酶，由4个30-40kDa的亚基组成，分子量146kDa，检测条带大约在36kDa。GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达，广泛用作Western blot蛋白质标准化的内参。

在生物学试验中，内参通常是一种已知含量或者稳定表达的蛋白质或RNA，用来标准化同一实验中不同样品的数量差异。例如，在western blot实验中，内参可以是乳腺癌细胞中常见的丰度相对稳定的蛋白质如β-actin或GAPDH。

GAPDH（甘油醛-3-磷酸脱氢酶）是参与糖酵解的一种关键酶，由4个30-40kDa的亚基组成，分子量146kDa，检测条带大约在36kDa。GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达，广泛用作Western blot蛋白质标准化的内参。

Gapdh内参基因贴抗体是用于检测Gapdh表达量的抗体，通常是由兔、小鼠或大鼠制备的多克隆抗体。

GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达，广泛用作Western blot蛋白质标准化的内参。

GAPDH：广泛分布于各种组织中的细胞。B-ACTIN：分布在骨架当中。作用不同：GAPDH：被广泛用作抽提total RNA，poly(A)+ RNA，Western blot等实验操作的标准化的内参。

当然除了GAPDH抗体，β－Actin抗体、β－Tubulin抗体等也是最常见的内参抗体。GAPDH（甘油醛－3-磷酸脱氢酶）是参与糖酵解的一种关键酶，由4个30-40kDa的亚基组成，分子量146kDa，检测条带大约在36kDa。

因为GAPDH作为看家基因在同种细胞或者组织中的蛋白质表达量一般是恒定的，因此在使用GAPDH内参抗体时，将每个样品测得的目的蛋白含量与本样品的GAPDH含量相除，得到每个样品目的蛋白的相对含量，然后才进行样品与样品之间的比较。

【GAPDH的作用】广泛用作Western blot蛋白质标准化的内参，即将每个样品测得的目的蛋白含量与本样品的GAPDH含量相除，得到每个样品目的蛋白的相对含量，然后才进行样品与样品之间的比较。