制备单克隆抗体过程中_制备单克隆抗体过程中需要用到的工程技术有

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1、因此，只有杂交瘤细胞才能在HAT培养液中生长繁殖。

2、经HAT培养液筛选的杂交瘤细胞特异性也存在差异，所以必须从杂交瘤细胞群中筛选出能产生针对某一预定抗原快定簇的特异性杂交瘤细胞。

3、HAT选择性培养基是根据次黄嘌呤核苷酸和嘧啶核苷酸生物合成途径设计的。缺失这两种酶的细胞，在HAT培养基中，应该不能生存，只有发生融合或者其他情况下，才能是细胞重新获得用旁路途径进行DNA合成能力。

4、用具备这种特性的单个杂交瘤细胞培养成细胞群，可制备针对一种抗原表位的特异性抗体即单克隆抗体。制备过程免疫动物免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的过程。

5、杂交瘤细胞在小鼠腹腔内增殖，并产生和分泌单克隆抗体。约1-2周，可见小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水，即可获得大量单克隆抗体。(2)体外培养法将杂交瘤细胞置于培养瓶中进行培养。

1、提取合成专一性抗体的单个B淋巴细胞，但这种B淋巴细胞不能在体外生长。应用细胞杂交技术使骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合，得到杂交瘤细胞。

2、因为做完细胞融合后，存在5种细胞：未融合的骨髓瘤细胞、未融合的B细胞、两两融合的骨髓瘤细胞，两两融合的B细胞，以及骨髓瘤细胞和B细胞的融合细胞，而只有最后一种是我们所需要的。因此要做营养缺陷筛选选出杂合细胞。

3、制备单克隆抗体时，选用B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤的原因：哺乳动物感染抗原后，其体内形成相应的B淋巴细胞，B淋巴细胞能分泌相应的抗体凝聚或杀死这些抗原。

单克隆抗体技术的重大意义在于可以用不纯的抗原分子制备特异性强、纯度高、均一性好的单克隆抗体。单克隆抗体的应用：①医学诊断；②抗原蛋白的提纯；③肿瘤的导向治疗和放射免疫显像技术。

如果能选出一个制造一种专一抗体的细胞进行培养，就可得到由单细胞经分裂增殖而形成细胞群，即单克隆。单克隆细胞将合成一种决定簇的抗体，称为单克隆抗体。

【答案】：基本原理：小鼠骨髓瘤细胞在体外适当条件下可无限增殖，但不能分泌抗体，而抗原免疫小鼠的脾细胞(B细胞)能产生抗体，但不能在体外无限增值。将两种细胞融合和就同时具有了无限增殖和分泌抗体的功能。

1、④将选择细胞进行规模培养或注射到小鼠腹腔内增殖(活体培养基)；⑤从细胞培养液或小鼠腹水中提取大量的单克隆抗体。单克隆抗体技术的重大意义在于可以用不纯的抗原分子制备特异性强、纯度高、均一性好的单克隆抗体。

2、小鼠单克隆抗体的制备通常涉及以下流程步骤：免疫小鼠：选择一种目标抗原，并将其注射到小鼠体内，以刺激其免疫系统产生特异性抗体。通常会在一定时间间隔内多次免疫小鼠。

3、过程 1）免疫脾细胞的制备制备单克隆抗体的动物多采用纯系 Balb/c小鼠。免疫的方法取决于所用抗原的性质。免疫方法同一般血清的制备，也可采用脾内直接免疫法。

4、此类抗体是专一的，或者说是同一种蛋白质，因此是单克隆的。杂交瘤技术制备单克隆抗体的主要步骤。(1)抗原制备。(2)免疫动物。(3)免疫脾细胞和骨髓瘤细胞的制备。(4)细胞融合。(5)杂交瘤细胞的选择培养。

5、（一）脾细胞 1．材料 (1)免疫过的血清抗体滴度高的Balb/c鼠。 (2)1640培养液单克隆抗体制备流程 (3)5％FCS－1640营养液 2．操作方法 (1)拉颈或用CO2处死小白鼠。

6、单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均仅针对某一特定抗原表位的抗体。

（二）筛选的目的———获得杂交瘤细胞（三）筛选的方法用选择性培养基来完成，即HAT培养基。含有次黄嘌呤、氨基喋呤和胸腺嘧啶，其中氨基喋呤可阻断DNA合成的主要途径。

第一次筛选：是否拥有抗体基因并且能表达。第二次筛选：已经融合的细胞是否能够表达抗体。

第二次筛选：（1）筛选对象：多克隆杂交瘤细胞群体。（即产生多种抗体的脾-瘤细胞混合群体。