elisa直接法测抗体

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系统放大不同在进行系统放大时，间接竞争法一般可以使用酶标二抗。因为二抗可以针对抗体的多个部位，所以存在放大效应，从而能提高间接法的灵敏度。

ELISA实验所有方法的缺点很明显：重复性不好；收自身抗体、嗜异性抗体等干扰，易出现假阳性；不论仪器和手工操作，干扰因素较多。影响最大的是温度和时间。

直接法需要先把抗原吸附到盘子的表面，然后再加抗体。而间接法盘子表面是事先吸附好了抗体，便于大规模的商业化生产。

双抗体夹心法：(1) 包被：用0.05M PH牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。

反应模式与双抗体夹心法类似。用特异性抗原进行包被和制备酶结合物，以检测相应的抗体。与间接法测抗体的不同之处为以酶标抗原代替酶标抗抗体。此法中受检标本不需稀释，可直接用于测定，因此其敏感度相对高于间接法。

该方法一般用来检测具有较少表位的小分子物质，当然，这种方法也可以用来检测大分子抗原物质甚至是抗体。检测大分子抗原物质时，由于空间位阻的影响，使得该检测方法没有双抗体夹心法检测大分子抗原物质灵敏度高。

1、建议保存酶标板框，以备下次或者今后试验使用.，10，检测原理：本实验采用双抗体夹心ELISA法。

2、ELISA的基本原理实验基于抗原与抗体的高度特异性结合，利用酶标记技术和吸附作用进行检测和定量分析。基本步骤包括：涂覆固相载体、非特异性结合位点的阻断、特异性抗原与抗体的结合、酶标记二抗的结合、底物添加和反应终止。

3、ELISA实验原理是酶分子与抗体或抗抗体分子共价结合，此种结合不会改变抗体的免疫学特性，也不影响酶的生物学活性。酶标记抗体可与吸附在固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合。

①板孔的选择：ELISA级别的微孔板。②抗体选择：选择支持ELISA实验的抗体，根据推荐浓度稀释或摸索最适浓度。③包被缓冲液：pH6碳酸盐缓冲液或pH2磷酸盐缓冲液。④包被温度：2-8 ℃过夜包被或室温（37℃）包被2h。

步骤：免疫识别是在聚苯乙烯制成的96孔板上包被抗体，而后利用抗体识别待测的抗原（通常是疾病的蛋白质生物标记物，病毒，细菌等等，从复杂待测液中将抗原吸附到96孔板表面。

操作步骤：1．从已平衡至室温的密封袋中取出试验所需板条，未用的板条和干燥剂请放回铝箔袋内压实自封条，密封口袋，放回4℃。

ELISA的基本原理实验基于抗原与抗体的高度特异性结合，利用酶标记技术和吸附作用进行检测和定量分析。基本步骤包括：涂覆固相载体、非特异性结合位点的阻断、特异性抗原与抗体的结合、酶标记二抗的结合、底物添加和反应终止。

elisa的实验步骤用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃过夜。次日洗涤3次。加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时，洗涤。

1、ELISA法是一种免疫学检测方法，也常被称为酶联免疫检查法。它是通过将待检测的分子与特定抗体结合，再添加标记有酶的二抗，以及特定底物，通过观察样品中的变色反应来定量分析待测分子的含量。

2、ELISA常用的有直接法测定抗原、竞争法测定抗原、双抗体夹心法测定抗原等方法。

3、ELISA即酶联免疫吸附测定，指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法。

4、ELISA是酶联免疫吸附测定法 (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay ， ELISA) 的简称。它是在免疫酶技术的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术。