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请问免疫组化如何正确选择和使用二抗
源性一抗如果需要做共定位,那么就需要不同源性的且要能够用于人组织的,可以做组化的,二抗建议选择驴抗,这样用处多;如果说是做组织化学,那么一抗源性就无所谓了只要能用于人的组织,二抗相应配套就行。
如果一抗为多克隆抗体,由于多克隆抗体主要是IgG类,因此相应的二抗应该选择抗IgG抗体。
例如:如果你的一抗是小鼠源的单克隆抗体,二抗则选抗小鼠的二抗(山羊抗小鼠或者兔抗小鼠等均可);如果一抗是从兔血清里制备的兔源多克隆抗体,则相应的二抗需要选择抗兔的二抗。
如何选择二抗
如果一抗为多克隆抗体,由于多克隆抗体主要是IgG类,因此相应的二抗应该选择抗IgG抗体。
二抗选择 (1)种属来源。主要根据一抗种属来源而决定二抗来源,如一抗是小鼠来源,那二抗就买抗小鼠的即可(羊、兔等均可)。(2)标记物的选择。有HRP、Biotin、荧光素等标记物。
一抗是与底物相结合的,同时一抗必须有抗原识别位点,能被另一种抗体识别并结合。二抗是能与一抗的抗原识别位点识别并结合,同时,二抗必须有可以观测、计量的性质。
种属来源要匹配:根据所用一抗选定二抗。一般来说,如果一抗是小鼠源性,二抗应选择兔/山羊或其它种属抗小鼠的抗体。
羊抗鼠igg会传染么
鼠的某种蛋白质(比如某种细胞因子或者膜蛋白)对于羊来说是异物,所以当将鼠的这种蛋白质注入羊体内的时候羊就会产生针对该抗原的抗体,当然抗体可能有好几种,其中IgG是最主要的抗体,该抗体就称为羊抗鼠IgG抗体。
Igg阳性并不能单独作为诊断的依据,对于igg阳性会不会传染这个问题来说,需要根据核酸检测的结果来判断。
用强毒羊种菌感染豚鼠后,提纯IgG,IgM能起保护作用。但也有人认为血清抗体与保护免疫不相关,仅可作为疾病活动的标志。如Hodgkin‘s病,淋巴瘤的患者布鲁氏菌病发病率高;布鲁氏菌抗原皮试在敏感患者呈典型超敏反应。
因此鼠IGG是针对鼠蛋白质而产生的抗体。抗原与抗体的性质区别在于抗体是一种产生于血液中的免疫球蛋白,能够鉴别和中和外来物质。而抗原是能引发抗体生成的物质。抗体包括IgG、IgM、IgA等,具有不同的浓度和形态。
用于定性检测人血清或血浆样本中的HIV 1型和HIV 2型的特异性抗体,以辅助诊断HIV感染,其阳性结果需用免疫印迹法确认。
生物素化羊抗小鼠IgG工作原理
羊抗小鼠IgG:是用小鼠去免疫羊产生的IgG类抗体。羊抗兔IgG抗体同理。
羊抗小鼠IgG:是用小鼠去免疫羊产生的IgG类抗体。补体(complement,C)是存在于正常人和动物血清与组织液中的一组经活化后具有酶活性的蛋白质。
兔IgG是从健康、未免疫的兔血清中提取出来的免疫球蛋白。它主要是通过辛酸到硫酸铵法或亲和层析法,并最终通过0.2um微孔滤膜过滤来完成的。羊抗兔igg,这是一种经过免疫的小鼠,用来产生针对兔免疫球蛋白(IgG)的抗体。
先将第一特异抗体(兔抗体或鼠腹水抗体)包被在固相载体,加待检抗原,加第二特异性抗体(鼠腹水抗体或兔抗体),再加入相应生物素化(羊抗鼠或羊抗兔)免疫球蛋白,再加抗生物素酶结合物,最后加入底物观察O.D.值。