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如何快速了解新接触的质粒(六)
1、第一步肯定是要确定你融合标签的目的，蛋白纯化首选His-Tag，WB优先选Flag-Tag。 其次蛋白标签对目的蛋白的影响：标签可能会干扰蛋白的正确折叠，因此需要考虑添加的标签是否对目的蛋白的表达有影响。
2、当两个细胞接触时，它可以从一个细胞跳到另一个细胞中去，也可以被噬菌体带着“走亲戚”。质粒转移到新的细胞，可以使新的细胞具有质粒所控制的特性。
3、按照质粒在寄主细胞中的复制能力，分为严紧型质粒和松弛型质粒。
flag标签作用
1、Flag标签（流感病毒（influenzavirus）抗原标记）是常用的蛋白质表达和纯化技术，可以方便地将Flag标签融合到所需蛋白质的N或C端，以便于后续的分析、检测和纯化等操作。
2、融合在N端的FLAG，其可以被肠激酶切除（DDDK），从而得到特异的目的蛋白。因此现FLAG标签已广泛的应用于蛋白表达、纯化、鉴定、功能研究及其蛋白相互作用等相关领域。
3、FLAG作为融合表达标签，其通常不会与目的蛋白相互作用并且通常不会影响目的蛋白的功能、性质，这样就有利用研究人员对融合蛋白进行下游研究。
4、如果攻击者知道了这些标签，他们就可以利用它们来绕过安全系统。另外，flag标签也可能会给攻击者提供一些更多的信息，让攻击者更容易发现漏洞，从而使攻击者能够更容易地攻击系统。干扰是指影响信息传输，传播或接收的不利因素。
5、Flag的中文翻译意思为旗帜，信号旗，flag意思就是表明一个振奋人心的决心或者行为。
常见的融合蛋白表达标签有哪些呢?
1、纯化：FLAG作为融合表达标签，其通常不会与目的蛋白相互作用并且通常不会影响目的蛋白的功能、性质；融合FLAG的目的蛋白，可以直接通过FLAG进行亲和层析，此层析为非变性纯化，可以纯化有活性的融合蛋白，并且纯化效率高。
2、xHis 标签，也称为多组氨酸标签（polyhistidine ），His6标签或hexa组氨酸标签，这是一种在转染的细胞中目标蛋白的C端或N端上由至少6个组氨酸残基链接上所组成的氨基酸序列。
3、MBP，麦芽糖结合蛋白标签蛋白大小为40kDa，由大肠杆菌K12的malE基因编码。MBP可增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。SUMO，SUMO标签蛋白是一种小分子泛素样修饰蛋白，是泛素类多肽链超家族的重要成员之一。
4、His标签，也是小标签，多指6个组氨酸多肽，该标签对目标蛋白的空间结构影响极小， 可融合到N端或者C端，一般无需切除也不会对目标蛋白功能产生影响，可购买商业化的Anti-His抗体检测。His标签常用于蛋白质印迹实验。
HA-tag是什么意思
约为63kDa。ha标签是一种分子量约为63kDa的表面糖蛋白。这意味着ha标签的大小约为63千达尔顿（kDa）。透明质酸，分子式(C？H？NO？)n（n为下标），也被称作玻尿酸、玻璃酸，其英文名hyaluronicacid，简称HA。
蛋白检测标签蛋白：Myc-Tag，Flag-Tag，HA-Taq等。荧光蛋白表达标签：GFP，mCherry等。
其93bp-125bp是HA-tag （序列：atggaata cccttacgat gtacccgatt atgcc）至于3*HA-Tag的意思应当是连续的三个HA-Tag，就像常用的6*His-Tag一样是6个连续的His氨基酸。
以His-Tag纯化标签结合金属螯合亲合层析，为重组蛋白质的分离纯化提供了一个有力的工具。
氨基酸序列。HA标签(氨基酸序列：YPYDVPDYA)是一段来源于人流感病毒血凝素(HA)蛋白第98～106位氨基酸的短序列。HA标签的分子量为1KDa，是目前广泛应用的表位标签之一。
co-ip实验中ha/flag是融合表达的意思。Co-IP的优势就是可为客户定制服务，做融合表达如flag、tag、HA等，更加严谨验证与探索细胞内生理状态下的结合与互作，更具说服力。
CoIP结果查看
鉴定coip特异性：首先需要确定Co-IP是否有特异性，确认共沉淀下来的蛋白质是否只是与目标蛋白物质有相互关系。可以通过WB或MS等技术验证。
实验操作：将样品和标准品加入COIP试剂中，混合均匀后加入一定量的试剂A和试剂B，然后进行离心和孵育。接着将样品移入分光光度计中测量吸光度值，并记录下来。
EDTA是用来螯合Ca2+的，这样加了EDTA后，就会抑制Ca2+结合到钙调蛋白AtCAM2/3/5上。实验结果说明AtCAM2/3/5能够与Pi13相结合，并且这种结合依赖于Ca2+。
