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流式细胞仪分选细胞,怎样选择抗体
T细胞用CD3和CD4的抗体，CD8 T细胞用CD3和CD8的抗体，单核细胞用CD14抗体，巨噬细胞用CD68抗体，树突状细胞用CD1a、CD11c、CD83等的抗体。
我们可以尽量选择在说明书上有流式图形的抗体，或者选择荧光素种类最多的克隆号的抗体 2) 荧光素 可以登陆，输入荧光素和检测的BD流式细胞仪机型及激发光，就可以查到相应的波长。
抗CD3荧光抗体。CD3为TCR成分之一，表达于T细胞。流式细胞分析时，CD3阳性细胞群即为T细胞群。抗CD19或抗CD20荧光抗体。
最好是把荧光素的强度和抗原表达量配对为反向。比如要检测三个抗原A， B，C， A的表达量最高，就尽量选标记了荧光强度最弱荧光素的抗体，比如Pacific Blue。而表达量最低的抗原，就选荧光强度最高的，比如APC。
流式检测细胞因子，有两种做法：第一种是检测细胞内的，需要固定和通透细胞膜，然后加抗体染色，在洗去未结合的抗体 另外一种是荧光小珠为基础的，检测溶液内细胞因子。可以同时检测一个系列。
流式细胞术测细胞表面抗原步骤
1、定量细胞浓度 分为2组，一组为实验组，另一组为抗体对照组 两组都先加入非特异性的IgG，封闭可能的Fc受体 按照抗体生产厂家的推荐浓度加入抗体，对照组加入同样荧光标记的非特异性同型抗体。
2、试剂平衡至室温。准备：消毒台面；穿戴工作服，帽子，口罩和手套，放置棉签，草纸和有盖垃圾桶（内装有消毒剂）。写编号纸并编号。
3、制备细胞悬液，计数 分装，按照每个EP（5ml）管1-2*10 6个细胞分装，3500rpm，4度离心。用100ulPBS重悬，加入10ul大鼠血清封闭，4度避光30min。加入相应的荧光标记的抗体，混匀，避光，4度孵育30min。
4、，加入1mlPBS洗两遍（3500rpm，4度，离心）。6，用200ul PBS重悬，经纱布过滤转至流式管，上级检测。这个是正对细胞表面分子，如果检测细胞内分子，需要在加封闭剂之前加入穿膜液。
5、流式细胞术的基本步骤包括：细胞样品的制备：将需要进行分析和排序的细胞样品制备成单细胞悬液，保证细胞在流式细胞仪中流动时不会聚集在一起。
6、流式细胞术的原理和应用分别如下：原理：细胞标记：通过将目标细胞表面或内部特定结构与荧光染料结合，使其在激光束照射下发出荧光信号。这些荧光标记物可以是抗体、DNA探针或别的化学染料。
流式细胞仪检测淋巴细胞因子时抗体怎么加
一般1毫升样本加10微升抗体，室温避光孵育半小时，PBS洗涤3次，最后重新悬浮于500微升PBS。还有就是，在加入你要的抗体前，要加入无荧光的非特异性抗体，先孵育15分钟，以封闭细胞表面的Ig受体，这个不需要洗涤。
具体的步骤就是你准备好5-6个样本管，细胞量和浓度都一致，用不同浓度的抗体来染色。上机检测后就算染色指数（SI）。
胞内染色：加入IFN-gamma；或IgG1的抗体20l，混匀，室温避光30分钟。加入2ml PBS，1000转，离心5分钟，弃上清。加入PBS 500l。上机前4度保存。1上机检测。
流式细胞仪在实验室主要用于哪些检测
流式细胞仪检测项目主要包括细胞表面标记分析、细胞内标记分析、细胞功能分析、细胞凋亡分析等。流式细胞仪是一种在液流中快速检测细胞特性的技术。
流式细胞仪有以下功能：临床诊断：比如白血病、淋巴瘤的分型；造血干细胞的检测；TBNK和细胞因子的检测等。 实验研究：只要细胞或者微球的大小在流式检测范围内，都可以用流式来分析各种抗原的含量或代谢状态等。
将Annexin V进行荧光素（EGFP、FITC）标记，以标记了的Annexin V作为荧光探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。
（9）流式细胞仪：用于分离和分析单个细胞或微粒的特定性质，如大小、形态、荧光等。（10）分析天平：用于测量生物样品中微量物质的质量或浓度。
【答案】：A 激光束射至经流体力学聚焦的个别细胞和粒子后，光散射在各个方向（360°）发射。有两个光散射参数需收集，前向角散射（FSC）主要用于检测细胞体积的大小。
流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或荧光。
