westernblot加抗体有泡沫可以用吗

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如果一抗为多克隆抗体，由于多克隆抗体主要是IgG类，因此相应的二抗应该选择抗IgG抗体。

当然，如果你使用的是多克隆抗体，那情况就更难说了，参考上上期避雷手册。一抗结合之后，就是采用的二抗，二抗可与一抗结合，而二抗蛋白结构被HRP辣根过氧化物酶标记，可与发光底物相结合，该底物极强的信号输出能够使皮克量的蛋白得到检测。

条件允许尽量选择进口，一抗abcam，Santa，CST等值得信赖，二抗的话国产的就行了。

一抗是多克隆抗体，或一抗、二抗浓度太高。可更换成单克隆抗体，或降低抗体浓度，缩短抗体孵育时间，优化一抗和二抗的使用浓度。洗膜不充分。

二抗需与一抗的类别或亚类相匹配。这通常是针对单克隆抗体而言。多克隆抗体主要是IgG类免疫球蛋白，因此相应的二抗就是抗IgG抗体。

(1)一抗的种属来源根据一抗的物种来源选择相应的抗该物种的二抗。

WesternBlot基本原理及步骤如下：Western blot即蛋白质印迹法（免疫印迹试验），它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。

WB实验是通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）将混合蛋白质样品分离后，利用特殊虹吸或电场装置印迹至固相介质（例如PVDF膜）上。

原理 Western Blot与Southern印迹杂交或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。

western blot原理简介：western blot技术主要是通过电泳技术区分不同的蛋白质组分，并将所分离的蛋白质转移至固体支持体上，通过特异试剂和抗体作为探针，对靶蛋白分子含量进行检测的一种方法。

1、从题意来看，实验中MARK抗体和磷酸化MARK抗体都是一抗，或许我们应该从抗体说明书找找细节，看一下两个抗体孵育结合的具体位点，以及两种抗体结合之后的band大小。

2、在ERK1/2信号通路中，当MAP3K、MAP2K或其它上游因子被激活时，它们会磷酸化（活化）ERK1/2。P-ERK抗体可以识别这种磷酸化形式的ERK1/2蛋白，用于评估ERK1/2信号通路的活动状态。

3、①免疫组化可以用来进行定位，但是不能精确定量，而且有时会有假阳性，不易与背景区分；Westernblot可以特异性检测某个蛋白质分子，进行定量，但是不能定位。

4、MAPK具有正负两方面的调控活性，例如Ras，ERK的激活因子被发现可以促进细胞凋亡，而WDR26蛋白――具有Gβ的类似结构，以及对MAPK信号途径潜在的负调控作用――能够促进细胞分裂，加速细胞的增殖过程。

5、你可以两种方法都可以做的。RAS：Ras蛋白是细胞内的一种小分子GTP结合蛋白，结合GTP时为活性形式，GDP时为失活状态，其活性形式是磷酸化形式，所以应该用磷酸化的RAS抗体，方法用western blot和免疫组化都行。

6、导致MAPKK 活化（MAPKK是一种具双重特异的蛋白激酶，它能磷酸化MAPK的苏氨酸和酪氨酸残基使之激活）→MAPK活化→进入细胞核→其它激酶或基因调控蛋白（转录因子）的磷酸化修饰。

WesternBlot基本原理及步骤如下：Western blot即蛋白质印迹法（免疫印迹试验），它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。

操作步骤（一）蛋白质样品获得：细菌诱导表达后，可通过电泳上样缓冲液直接裂解细胞，真核细胞加匀浆缓冲液，机械或超声波室温匀浆0.5-1min。然后4℃，13，000g离心15min。取上清液作为样品。

前面·我们已经介绍过SDS-PAGE，电泳完成后如果要进行western blot则需要转膜转膜：转膜有湿转和半干转两种不同方法。

western blot基本原理将混合抗原样品在凝胶板上进行单向或双向电泳分离，然后取固定化基质膜与凝胶相贴。在印迹纸的自然吸附力、电场力或其它外力作用下，使凝胶中的单一抗原组份转移到印迹纸上，并且固相化。

Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，经过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的蛋白质样品，转移到固相载体上，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。