hrp标记抗体（HRP标记抗体中抗体的浓度）

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辣根过氧化物酶（HRP）是目前在酶联免疫吸附试验中应用最为广泛的标记用酶。

辣根过氧化物酶主要来源于蔬菜植物辣根中，是由无色的糖蛋白和亚铁血红素结合而成的复合物，HRP是在酶联免疫吸附试验中应用最为广泛的标记用酶。

酶联免疫法是一种非常常用的生物化学实验方法，广泛应用于生物医学领域、病毒学及免疫学等领域。它利用酶标记抗体与其特异抗原或抗体的结合，并通过底物酶催化底物反应，从而实现了关键分析物质的检测和定量。

等。其中，HRP是最为常用的标记酶。ELISA检测常用的底物则有TMB、ABTS、OPD等。其中，TMB是最为常用的底物。TMB：3，3，5，5-四甲基苯基二胺。ABTS：2，2-联氨基双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)。OPD：邻苯二酚。

化学发光酶免疫测定中常用来标记抗原或抗体的物质是鲁米诺。

目前在免疫酶技术中常用的酶为辣根过氧化物酶(hrp)和碱性磷酸酶(ap)，其次还有葡萄糖氧化酶，β-半乳糖苷酶、溶菌酶和苹果酸脱氢酶等。本人用得比较多的是辣根过氧化物酶(hrp)的酶标记抗体。

四甲基联苯胺。根据酶免疫技术常用的底物知识点小结，ELISA常用的酶有辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶等，最常用的酶是辣根过氧化物酶（HRP），最常用的底物是四甲基联苯胺，常用的固相载体是聚苯乙烯。

ELISA技术中最常用的底物是TMB（3，3，5，5-四甲基联苯胺），它是一种发色剂，能够在酶催化下发生氧化反应，生成可见的蓝色产物。

免疫酶组织化学技术的常用酶及其底物（一）辣根过氧化物酶在免疫酶技术中，辣根过氧化物酶（HRP）是Z理想、应用Z多的标记酶，是从一种称为辣根的植物根部分离、纯化获得。

解析：直接化学发光免疫分析是用化学发光剂（如吖啶酯）直接标记抗体（抗原）。

电化学发光免疫测定是一种在电极表面由电化学引发的特异性发光反应，包括电化学和化学发光两部分。

化学发光酶免疫测定中常用来标记抗原或抗体的物质是鲁米诺。

TMB是一种优于0PD的新型HRP色原底物。其氧化产物联苯醌在波长450nm处有最大消光系数，假如HRP量少，过氧化氢溶液和TMB过量时，则形成蓝色的阳离子根。降低pH，即可使蓝色的阳离子根转变为黄色的联苯醌。

我说我们这边吧。HRP是辣根过氧化酶，我们显色液是A液，和B液，A液里是过氧化脲，B液里是TMB。HRP催化A液和B液反应，A提供O，B提供H。反应生成的物质是蓝色。终止后是黄色。

TMB显色液与HRP显色雷根生物3，3，5，5-四甲基联苯胺(TMB)是非常优越的酶免试验显色剂，能溶解于多种有机溶剂和双蒸水中。

用纯化的大肠杆菌内毒素(endotoxin)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入内毒素(endotoxin)，再与HRP标记的内毒素(endotoxin)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

HRP标记抗体纯化后抗体浓度的确定方法一抗的用量和样品中的目标分子含量相关，如果含量较高，就不需要用太多一抗，以免浪费和条带太亮不易分析。

WB实验是通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)将混合蛋白质样品分离后，利用特殊虹吸或电场装置印迹至固相介质(例如PVDF膜)上，再以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原。

现常用的有底物化学发光ECL和底物DAB呈色。原理如下（二抗用HRP标记）：反应底物为过氧化物+鲁米诺，如遇到HRP，即发光，将胶片进行扫描或拍照，用凝胶图象处理系统分析目标带的分子量和净光密度值。