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杂交袋如何抗体孵育
1、一抗是用封闭液稀释的，二抗用TBST；AB液1：1混合后即可；封闭液直接买的现成品，不贵，效果也很好；抗体孵育的时候用杂交袋，可以减少抗体的用量；显影定影用国产几块一包的即可。封闭液是PBST配置的5%脱脂奶粉。
2、一抗孵育结束后，用PBST或TTBS漂洗膜后再浸洗三次，每次5-10min。结合二抗：根据一抗来源选择合适的二抗，根据鉴定方法选择HRP或AP标记的抗体，按相应比例稀释(1：1000~1：10000)，室温轻摇一小时。
3、(五) 免疫反应(个人建议：还是使用杂交袋进行一抗和二抗的孵育，节约抗体)(1) 将膜用TBS从下向上浸湿后，移至含有封闭液的平皿中，室温下脱色摇床上摇动封闭1h。
4、一抗的用量要根据你的抗体的质量来看的，在抗体的说明书上一般都有推荐的浓度，刚开始可以做个中间的浓度摸下条件。在短期内一抗可以反复使用的，所以放在杂交袋中方便回收使用。
一抗孵育为什么要摇
根据查询39健康网显示，4度孵育一抗需要摇晃，一抗存在沉淀或凝集物通过摇匀，可以使一抗中的成分均匀分散，确保每一次使用时获得一致的浓度和效果。
需要。一抗孵育是指将鸟蛋放置在孵化器中进行人工孵化的过程，不摇床无法促进鸟蛋内胚胎的均匀发育，保持蛋的温度均匀分布，并提供生理上的刺激，不利于胚胎的发育。
也可能用透析袋封闭，更节约封闭液。只要保证膜面*与封闭液接触，可以不摇。一抗同理，的4℃孵育一夜。
需要。一抗二抗是指非抗体性抗原和能和抗体结合，在进行结合过程中，需要先在摇床上进行摇晃均匀，然后放4℃过夜，在使用时只需用手晃动即可。
二抗孵育时间
WB实验中，二抗孵育的时间通常为37℃1-2h。不过要注意，具体的孵育时间可能会根据实验条件的不同而有所变化，如抗体浓度、孵育温度等。在确保实验结果良好的情况下，建议根据具体情况对孵育时间进行适当调整。
二抗4度孵育时间是37度1-2h。二抗一般室温或37度30min-1h，浓度一般有工作液，若是浓缩液还要摸索浓度，一抗孵育温度有几种：4度、室温、37度，其中4度效果最佳。
可以**，二抗在4度环境下孵育一个小时是可以的。不过，具体的孵育时间要根据实际情况进行优化和调整，如孵育温度、抗体浓度以及具体的实验需求等。
孵育时间过长或一抗浓度过高，导致非特异性吸附，增加洗涤难度，最终因洗涤不彻底而出现非特性显色。总之，需要根据实验条件和实际情况来判断是否需要重新孵育一抗和二抗，以保证实验的准确性和可靠性。
二抗孵育时间超过两小时会怎么样
1、抗体失活：抗体在长时间的孵育过程中会失去活性，导致无法有效地与目标蛋白结合。这将影响到实验的准确性和可靠性，抗体是用来检测和识别目标蛋白的关键组分。
2、二抗孵育时间过长可能会导致以下问题： 抗体失活：长时间的孵育可能导致部分抗体失去活性，从而影响其与目标蛋白的结合能力。
3、该实验孵育时间过长，可能会产生以下影响：抗体失活：二抗孵育时间过长可能导致抗体失活，从而影响其与目标蛋白的结合能力。
4、不可以。参考二抗的说明书，按照适当比例用封闭液稀释辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗，二抗孵育时间为1至2小时，吸尽洗涤液后，立即加入稀释好的二抗，室温在摇床上缓慢摇动孵育，回收二抗。
抗体孵育的转速要求
②孵育的时间及温度参考试剂盒说明书。如有条件，建议加样孵育时使用shaker震荡仪，推荐轨道直径3mm，转速在500±50rpm。③检测抗体、酶标物的稀释比例、孵育温度、孵育时间严格根据说明书提示。
一抗的孵育时间与温度，抗体浓度有关。一般情况下，在37°C的条件下，孵育1-2小时左右。在室温的条件下，孵育3小时左右。在4°C的条件下，孵育18-24小时左右。
二抗孵育时间为1至2小时。参考二抗的说明书，按照适当比例用封闭液稀释辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗。吸尽洗涤液后，立即加入稀释好的二抗，室温在摇床上缓慢摇动孵育1至2小时。回收二抗。
将DNA-转染试剂复合物滴加至滚瓶中，轻轻混匀，调节滚瓶转速20转/小时 ，37℃培养箱培养10个小时后换3% 血清的 DMEM中糖500ml，调节滚瓶转速40转/小时。表达4天后收取上清。
一抗孵育多久
一抗一般孵育30.60分钟。一抗就是能和非抗体性抗原（特异性抗原）特异性结合的蛋白。种类包括单克隆抗体和多克隆抗体。
不可以。一抗是4度，孵育过夜16-20小时即可。孵育过久，会出现非特异性的条带。一抗的孵育时间与温度、抗体浓度有关。通常情况下，在37℃的条件下，孵育1-2小时左右。
通常情况下，在感染后4-6周，体内便会产生抗体，但有时可能需要更长的时间（可能长达3个月）才能产生足够的抗体以供检测。因此，通常建议在感染后3个月后进行一次HIV抗体检测，以确保测试结果准确无误。
一抗孵育温度有几种：4度、室温、37度，其中4度效果最佳；孵育时间与温度、抗体浓度有关，一般37度1-2h，4度过夜（从冰箱拿出后37度复温45min）。具体条件还要摸索。
WB一抗孵育时间的重要性 合适的WB一抗孵育时间可以最大程度地提高Western Blot实验的准确性。如果孵育时间太短，抗体与目标蛋白质结合不足，无法检测到目标蛋白的表达情况。
