flag标签一抗 flag标签抗体做IP的作用

本篇目录：

1、coip实验的原理：Co-IP实验通常依赖于特异性判断，即将目标蛋白质及其交互蛋白带有特定抗体空间上结合，并利用这一结合关系来沉淀出其它交互蛋白。

2、共沉淀法coip是常用的实验技术，用于检测蛋白质之间的相互作用关系以及识别它们在细胞中的复合物形成。其基本原理如下：细胞溶解：首先，将含有目标蛋白质的细胞或组织样品进行裂解，以释放细胞内的蛋白质。

3、coip实验原理：当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。免疫共沉淀，是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。

4、例如蛋白A在细胞内的蛋白量不同，或者有着不同的翻译后修饰，这是可以用A蛋白的抗体+prorein A beads来IP，从细胞中把A拉下，再用特异的抗体（如磷酸化，泛素化抗体）来检测A的变化。

1、由于Flag标签系统的纯化条件是非变性的，因此可以纯化所有有活性的融合蛋白。Flag标签可以通过加入肠激酶处理去除，肠激酶专一识别该肽序列C末端的5个氨基酸残基。

2、FLAG作为融合表达标签，其通常不会与目的蛋白相互作用并且通常不会影响目的蛋白的功能、性质，这样就有利用研究人员对融合蛋白进行下游研究。

3、FLAG标签只有8个氨基酸组成，因此它不会占据其他表位与结合域，避免导致融合蛋白的功能、分泌性以及转运发生改变。由于它的亲水性特点，FLAG标签倾向于定位在融合蛋白表面，因此更易与抗体结合以及被肠激酶酶解。

4、这个Flag标签抗体能检测到其他带Flag标签的蛋白吗？例如空载对照。如果空载也不行，那基本抗体就歇了。如果有，就要看Flag标签是不是正确表达了，如果表达不正确也会影响到检测的。

5、lag标签一般不影响细胞定位的，这个蛋白本身的细胞定位是哪里，融合之后还是哪里啊。

6、可能被删除或者隐藏了。可能是因为flag标签wb被删除或者隐藏了。在CTF比赛中，为了防止选手使用简单的方法获取flag，会对flag进行加密或隐藏处理。如果比赛组织者在设置flag的时候没有正确设置wb标签，就可能导致检测不到flag。

1、原因可能是没洗干净，如果是这个原因，随便再用几种其它抗体，也能检测到类似条带。

2、过程中，我们也欣喜地看到，这个五年常青的IP，其影响力已逐渐拓展到了更广泛的圈层。