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免疫组化后回收的一抗抗体出现混浊沉淀物是为什么,抗体还能用吗?
wb一抗会有沉淀是因为你的蛋白没有变性完全。反复用的抗体用久了会产生沉淀，毕竟抗体也是蛋白。至于对于实验的影响，一般有沉淀了就不建议继续用了。
无论是哪种原因，沉淀的出现都会造成抗体效价的下降，因为可能有一部分有效的抗体已经去到沉淀中，无法使用。当然也不排除抗体浓度很高，即使损失一部分沉淀，仍然有较高的效价的可能。
第一节 沉淀反应 沉淀反应的原理 沉淀反应：可溶性抗原与相应抗体在溶液或者凝胶中特异性结合后，如果两者比例合适，可相互作用形成不溶性的免疫复合物，出现肉眼可见的不溶性沉淀物。(比例合适时，由分子热运动引起。
免疫沉淀实验的操作步骤比较多，同时由于在非变性条件下进行实验，所以要得到一个完美的实验结果，不仅需要高质量的抗体，同时对免疫沉淀体系也需要有严格的控制指标。
免疫比浊： 在一定量的已知抗体中分别加入递增量的抗原，经一段时间反应后用浊度仪测量抗原抗体沉淀物的浊度，浊度与抗原浓度呈正比。
一抗反复冻融之后会有影响吗
1、混凝土在寒冷地区，特别是在既接触水，又遭受冷冻的环境中，常常会被冻坏。
2、会坏。引物的反复冻融，是一个物体的反复冻住解冻，会对物体的外观造成损坏，反复的速冻会对物体的外壳造成缩减，会损坏。冻融是指土层由于温度降到零度以下和升至零度以上而产生冻结和融化的一种物理地质作用和现象。
3、有。根据查询相关公开信息显示，反复冻融易导致抗生素失效，如果每次的使用量很小，可以适当分装后再使用。为了安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
4、反复冻融蛋白样品在跑蛋白电泳时可能会对实验结果产生影响。一方面，反复冻融可能导致蛋白降解，这样SDS-PAGE出来的结果和降解前肯定不一样。
5、一般情况下，免疫球蛋白反复冻融次数不要超过3次；如果需要反复使用，根据用量分装后冻存。室温下放置一周，这个要根据蛋白的分子大小和是否放了防腐剂。要是购买的商业产品，可以参考说明书确定。一般不能室温下放置一周。
WesternBlot基本原理及步骤
1、WesternBlot基本原理及步骤如下：Western blot即蛋白质印迹法（免疫印迹试验），它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。
2、操作步骤 （一）蛋白质样品获得：细菌诱导表达后，可通过电泳上样缓冲液直接裂解细胞，真核细胞加匀浆缓冲液，机械或超声波室温匀浆0.5-1min。然后4℃，13，000g离心15min。取上清液作为样品。
3、前面·我们已经介绍过SDS-PAGE，电泳完成后如果要进行western blot则需要转膜 转膜：转膜有湿转和半干转两种不同方法。
4、western blot基本原理 将混合抗原样品在凝胶板上进行单向或双向电泳分离， 然后取固定化基质膜与凝胶相贴。在印迹纸的自然吸附力、电场力或其它外力作用下， 使凝胶中的单一抗原组份转移到印迹纸上， 并且固相化。
5、Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，经过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的蛋白质样品，转移到固相载体上，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。
6、剖析Western blot原理是一种把电泳分离的组分从凝胶转移到一种固相支持物(NC膜或PVDF膜)，并以针对特定氨基酸序列的特异性试剂作为探针检测。 WB采用抗体作为探针，抗体可以与附着在固相支持物的靶蛋白的抗原表位发生抗原-抗体免疫反应。
一抗室温可以放多久
1、抗体很稳定的，室温放一个晚上不会有什么问题，所以一抗放室温半小时不会坏。
2、℃。回收的一抗的保存时间和温度，不同的抗体具有不同的稳定性和保存要求，回收的一抗保存在4°二个月左右。
3、抗体退化或失活。一抗4℃保存，有效期12个月，储存在室温下一般会由于微生物的成长导致抗体退化或失活。第一抗体（一抗）就是能和非抗体性抗原（特异性抗原）特异性结合的蛋白。
4、在室温的条件下，孵育3小时左右。在4℃的条件下，孵育18-24小时左右。如果一抗的浓度过高或者是孵育时间过长，会导致非特异性吸附，增加洗涤的难度，最终因洗涤不彻底而出现非特性显色。
5、一抗稀释液常温放了一个小时还能用，一抗稀释液（BondTM Primary Antibody Diluent）是一种化学溶液，产自英国一抗具有个体差异性，有的可以低温保存重复使用很久，有的择很容易变质。
6、疫苗的保存条件和有效期是通过长期稳定性的评价数据确定的。通常将疫苗在2-8℃条件下进行了6个月，1年甚至2年的观察后发现疫苗的活力不下降，疫苗也不会变质，也不会降解成小分子，这样就确定了疫苗的保存条件和有效期。
回收的一抗怎么保存
℃。回收的一抗的保存时间和温度，不同的抗体具有不同的稳定性和保存要求，回收的一抗保存在4°二个月左右。
可以回收。首先要将一抗从装有它的仪器或工具中及时拆下来，然后再将它的密封袋及时存放起来；其次，尽量使空气进入一抗的密封袋里，以便消除它的剧毒；最后，将一抗打包起来，送到正规的回收公司处理即可。
工作液根据需要稀释在5%奶粉里，再加入少量叠氮化钠（大约0.01% w/v），4度保存。Alisa_lin(站内联系TA)分装，-20度保存。
抗体退化或失活。一抗4℃保存，有效期12个月，储存在室温下一般会由于微生物的成长导致抗体退化或失活。第一抗体（一抗）就是能和非抗体性抗原（特异性抗原）特异性结合的蛋白。
次日，回收一抗，做好标记，-20℃保存，可再使用3~4次。将膜放入1×TBST中，摇床上清洗三次，每次10min。 配制具有种属特异性的HRP标记的二抗(抗鼠或抗兔)，1：2000稀释，加入上述配制的5%牛奶4ml，再加入2ul 二抗，混匀，现配现用。
