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流式细胞术同种属的抗体可以共染吗
1、你挑选的4个荧光已经分布到4个不同的通道,貌似可以共染色然后同时读取。 具体有一些特别注意的地方分析如下:1。efluor660的发射光谱同670LP filter的波段有严重重叠但是因为FL3和FL4由不同laser激发,我认为不会造成问题。
2、流式细胞术能在细胞分子水平上通过单克隆抗体对单个细胞或其他生物粒子进行多参数、快速的定量分析。它可以高速分析上万个细胞,并能同时从一个细胞中测得多个参数,具有速度快、精度高、准确性好的优点。
3、流式细胞分析中经常要用到2种以上的荧光标记抗体进行染色,而目前所使用的多种荧光染料发射谱间有一定重叠。荧光补偿则可以从探测器种除去匹配荧光以外的任何荧光信号。补偿方式:任意两个通道之间都可以调节。
4、同型对照是使用与一抗相同种属来源、相同亚型、相同剂量和相同的免疫球蛋白及亚型的免疫球蛋白,用于消除由于抗体非特异性与细胞结合而产生的背景染色。
5、实验研究。根据前面所说的原理。只要可以被染色的,都可以用流式来分析。可以检查各种抗原的含量。代谢状态等等。细胞的分选。最后,根据染色的状态,可以把不同的细胞筛选出来,进行下一步的研究。
6、两个荧光一抗是同一种属的做法:对其中一个荧光染色之后再加DAPI复染,回避引入两个二抗的冲突。免疫荧光标记的一抗的要求主要有。一抗是单抗。
流式细胞术同一种细胞孵多种抗体怎么做
1、流式细胞术实验:制备细胞悬液,计数 分装,按照每个EP(5ml)管1-2*10 6个细胞分装,3500rpm,4度离心。用100ulPBS重悬,加入10ul大鼠血清封闭,4度避光30min。
2、在进行多荧光染色的时候,相同的细胞会因为染色顺序不同而导致荧光强度的差异。解决办法为:预实验。做一系列的不同染色顺序的样本,通过对染色前和染色后的各种样本进行比较分析,判断染色顺序对细胞造成的影响。
3、试剂平衡至室温。准备:消毒台面;穿戴工作服,帽子,口罩和手套,放置棉签,草纸和有盖垃圾桶(内装有消毒剂)。写编号纸并编号。
4、流式细胞术的基本步骤包括:细胞样品的制备:将需要进行分析和排序的细胞样品制备成单细胞悬液,保证细胞在流式细胞仪中流动时不会聚集在一起。
流式细胞术有哪些需要注意的问题
还有就是尽量避免使用二抗,要使用已经标记好荧光染料的单克隆一抗来染细胞。在选择不同的颜色时,还最好要避开有光谱重叠较多的颜色。每一个抗体在使用前都要做抗体浓度的优化滴定,计算染色指数,找到最佳工作浓度。
流式细胞分析中经常要用到2种以上的荧光标记抗体进行染色,而目前所使用的多种荧光染料发射谱间有一定重叠。荧光补偿则可以从探测器种除去匹配荧光以外的任何荧光信号。补偿方式:任意两个通道之间都可以调节。
(6)注意在冷环境下操作染色,或加入叠氮钠,保证细胞免疫荧光定量分析精确和稳定。(7)标本保存,免疫荧光染色后,标本不固定可以在4摄氏度避光情况下保存24小时。
流式细胞计可同时进行多参数测量,信息主要来自特异性荧光信号及非荧光散射信号。测量是在测量区进行的,所谓测量区就是照射激光束和喷出喷孔的液流束垂直相交点。
流式细胞术的设门的注意事项:通过流式细胞术分析细胞样品时,欲获得更加准确的分析结果,应用最优化的设门策略非常重要。
博凌科为解仅供参考一下:流式样品的准备:DNA含量的测定:用本法可以测定细胞周期、细胞倍体和凋亡,在样品的制备中存在的问题主要是细胞的聚集和碎片,建议在固定细胞时加入3%小牛血清。
怎么选择各公司的流式抗体?
1、第三荧光的颜色选择一是你的流式仪一定要能读,二是跟你需要counterstain的其他流式抗体错开频率。第四抗体的球蛋白亚型。因为要根据这个选择isotype对照用抗体。
2、abcam、Sigma、cst 的抗体都不错,但是价格相对贵些,而且抗体的量比较少,Santa的抗体量比较多,但是质量不稳定,要碰运气。国产的话相对就便宜很多,推荐万 类生物,试用过他家很多抗体,条带都出的不错。
3、eBioscience的抗体挺好用的,就是到货时间比较慢。
4、抗体在生物学中有着很大的作用,比如中和毒素和阻止病原体的侵入,可以简单的防止人体的各种病毒的侵入。抗体还可以识别并且特异性结合抗原,这是其最主要的功能。增强人体的免疫力,新生婴儿的抗体也可以抗感染。
5、如果是单色实验,荧光素的亮度越强越好,比如标记了APC的抗体就要比标记了pacific blue的在相同抗原量,抗体用量相同的情况下,要亮很多 如果是多色实验,除了不要使用光谱重叠度高的荧光素以外,还要搭配染色指数。
6、推荐您选择贝克曼库尔特公司的流式细胞仪,贝克曼库尔特自1953年推出世界上第一台流式细胞分析仪后,对技术革新一直执着追求,成为细胞研究领域的领跑者,正为科研人员提供各式各样的流式分析分选产品产品。
流式细胞术,你这磨人的小妖精
流式细胞术(Flow Cytometry ,FCM)是一种对液流中排成单列的细胞或其它生物微粒逐个进行快速定量分析和分选的技术。
你这个磨人的小妖精,这样的话是带有亲昵的玩笑色彩的。能说这种话的人,应该跟你的关系比较亲近,彼此之间可以随心所欲地开玩笑。如果不是对你有想法,就是很会撩拨女孩子。
“磨人的小妖精”意思是:讨人喜欢的人。也可以理解为你这挑逗人的小妖精。这是一句网络流行语。表达对某人或者某物的喜爱之情的一种流行说法。
磨人的小妖精的意思是:讨人喜欢的人。也可以理解为“你这挑逗人的小妖精。”这是一句网络流行语。是表达对某人或者某物的喜爱之情的一种流行说法。
最开始的出处是葫芦娃,是金刚葫芦娃对蝴蝶妹妹说的。