双标抗体的选择,双标检测

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如果一抗为多克隆抗体，由于多克隆抗体主要是IgG类，因此相应的二抗应该选择抗IgG抗体。

二抗选择（1）种属来源。主要根据一抗种属来源而决定二抗来源，如一抗是小鼠来源，那二抗就买抗小鼠的即可（羊、兔等均可）。（2）标记物的选择。有HRP、Biotin、荧光素等标记物。

种属来源要匹配：根据所用一抗选定二抗。一般来说，如果一抗是小鼠源性，二抗应选择兔/山羊或其它种属抗小鼠的抗体。

那么你的一抗的反应种属当中，要包括大鼠。第三要根据你的一抗来源选择你的二抗，比如你的一抗选的是小鼠来源的抗体，你的二抗就要选择XX抗小鼠的，如果你的一抗选的是兔源性的抗体，二抗就选择XX抗兔的。

例如：如果你的一抗是小鼠源的单克隆抗体，二抗则选抗小鼠的二抗（山羊抗小鼠或者兔抗小鼠等均可）；如果一抗是从兔血清里制备的兔源多克隆抗体，则相应的二抗需要选择抗兔的二抗。

条件允许尽量选择进口，一抗abcam，Santa，CST等值得信赖，二抗的话国产的就行了。

如果一抗为多克隆抗体，由于多克隆抗体主要是IgG类，因此相应的二抗应该选择抗IgG抗体。

抗体的选择作为western来讲，理论上单抗比多抗的特异性要好，但单抗种类较少一般价格偏高，所以一般来说多抗足够了。

一抗选择实验类型的种属，二抗选择种属来源。一抗确定你的实验类型，Elisa，WB，IHC，ICC，还是FACS，确定实验样本的种属，Human，Mouse，还是Rat。

二抗应选用与使用的一抗相同的物种来源，例如：如果你的一抗是小鼠源的单克隆抗体，二抗则选抗小鼠的二抗（山羊抗小鼠或者兔抗小鼠等均可）；如果一抗是从兔血清里制备的兔源多克隆抗体，则相应的二抗需要选择抗兔的二抗。

你好，双染免疫荧光染色可以同时观察两个颜色，因为双然免疫荧光染色是用来同时观察两个染色体的。一种荧光剂，所以它可以同时观察两个颜色。

两个荧光一抗是同一种属的做法：对其中一个荧光染色之后再加DAPI复染，回避引入两个二抗的冲突。免疫荧光标记的一抗的要求主要有。一抗是单抗。

同时使用两种抗体是有前提的，需要抗体间是可以兼容的。最常见的是使用来自两个物种的一抗，比如鼠和兔，在一抗孵育时同时加入，二抗时同时加入针对一抗产生物种特异带有不同荧光素的二抗就可以。

免疫荧光染色实验一抗二抗结合时间一般需要1-2小时左右。在进行免疫组化染色时，经过抗原预处理之后，首先加入一抗进行孵育。

问：近期要做免疫荧光双标，不知哪位有免疫荧光双标技术的详细步骤及其注意事项？参考见解：我正在做冰冻组织切片的免疫荧光双染。

因为一种一抗只识别一种底物，如果每种一抗都需要荧光标记，那这样成本很高。而二抗既可以和一抗结合，又带有可以被检测出的标记（如带荧光、放射性、化学发光或显色基团），作用是检测一抗，提高了通用性。

1、抗体的选择作为western来讲，理论上单抗比多抗的特异性要好，但单抗种类较少一般价格偏高，所以一般来说多抗足够了。

2、如果一抗为多克隆抗体，由于多克隆抗体主要是IgG类，因此相应的二抗应该选择抗IgG抗体。