抗体设计原理

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抗体的选择作为western来讲，理论上单抗比多抗的特异性要好，但单抗种类较少一般价格偏高，所以一般来说多抗足够了。

如果一抗为多克隆抗体，由于多克隆抗体主要是IgG类，因此相应的二抗应该选择抗IgG抗体。

浓缩型抗体根据近几年来使用的情况认为，它有许多优点，但也有许多不足之处：①可作为各种疾病检测的常备抗体。

我们在选择V5抗体时，主要根据自己的需要，特别是实验应用上的需要。另外，一个抗体检测后的应用类型越多，在使用过程中的选择余地就越大；而小鼠源的单克隆抗体一般在特异性、稳定性以及效价都要优于多克隆抗体。

1、在抗体制备过程中，免疫原是影响抗体质量的最重要因素之一。

2、多克隆抗体的制备一般包括以下几个步骤：制备抗原。选择实验动物。动物免疫。试取血进行测试，看看是否成功免疫。如果成功免疫，杀死实验动物，采集全部血清。纯化出抗体。鉴定抗体。

3、CDR与抗原结合过程受到FR区域的影响，动物源CDR与人源Fr结合，可能会改变抗体原有CDR的空间结构，进而降低重组抗体与抗原的亲和力。

4、（1）多克隆抗体的制备。①免疫方法：对多克隆抗体，免疫方法一般有皮下或肌肉免疫法、皮内免疫法、淋巴结免疫法和混合法等。

5、（4）注意母源抗体的影响免疫过的怀孕母畜，其产下的仔畜体内有母源抗体存在。

靶向CHO细胞关键调节基因，通过基因工程手段改造和驯化产生CHO细胞亚系，使表现出更好的凋亡抗性、代谢、糖基化、蛋白表达、细胞周期调节、增殖、分泌或细胞骨架动力学。

稳转细胞株构建选择宿主细胞系：选择能够稳定承载外源基因的细胞系作为宿主细胞。常用的细胞系包括HEK29CHO、HeLa等。构建表达载体：设计和构建包含目标基因的表达载体。

验证细胞稳定性和表达在细胞筛选和扩展完成后，需要验证构建的细胞稳定性和表达情况。这可以通过多种方法实现，例如荧光染色、Western blotting等。

制备去内毒素质粒，瞬时转染二氢叶酸还原酶(dhfr)缺陷型CHO细胞系，纯化少量抗体，检测其特异性及亲和力指数SPR。经客户确认，建立稳转体系，加压筛选获得稳定表达的细胞株。

实验设计我们分析客户提供的重轻链理论序列，符合理论分子量大小，抗体蛋白也无跨膜等特殊结构，因此我们设计思路为：以客户的基因序列翻译的蛋白序列为源模板，通过密码子优化一套最适宜HEK293T细胞系的基因序列。

1、基本过程是动物免疫、细胞融合、克隆筛选、单克隆抗体性质鉴定、腹水诱发、收集和纯化等。（3）重组抗体的制备。

2、随着DNA重组技术的发展，人们开始用基因工程的方法制备部分或全人源化的基因工程抗体（Genetic engineering antibody），如人-鼠嵌合抗体、改型抗体、双特异性抗体、小分子抗体等。

3、模拟天然免疫系统亲和力成熟过程无需人工接种可替代动物多克隆抗体构建康体苦时。轻重链可变区基因在体外随机组合，可产生体内部存在的轻重链组合，得到新的特异性抗体。