哪个标记的流式抗体好（流式抗体制备）

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定义：MitoTracker Red CMXRos 是一种红色荧光染料，用于对活细胞线粒体进行染色，并且该染料的积累取决于膜电位。乙醛固定后，该染料可稳定保存。

荧光探针可以通过蛋白质交联剂共价结合在单克隆抗体上。免疫荧光标记最常用的染料有异硫氰酸荧光素、藻红蛋白以及AlexaFluor系列染料等。

GoldView染料 GoldView(GV)是一种可代替溴化乙锭（EB）的新型核酸染料，其灵敏度与EB相当，使用方法与之完全相同。在紫外透射光下双链DNA呈现绿色荧光，也可用于RNA染色。

免疫标记技术有三种基本类型：免疫荧光法、免疫酶技术和放射免疫技术。天津卫生人才网专家带大家一起来学习一下它们的标记物。

免疫标记分析技术主要包括：放射物标记、酶标记、发光标记、荧光标记和金标记方法。

根据查询哔哩哔哩显示，标签抗体和二抗是两种不同的抗体。

抗体可分为五类：IgG 、 IgA 、 IgM 、 IgD 、 IgE 。它们分别的功能主要有：（1） IgG ：是最重要的抗感染分子，包括抗菌、抗病毒、抗毒素等。 IgG 还能激活补体，结合并增强巨噬细胞的吞噬功能。

二抗需与一抗的类别或亚类相匹配。这通常是针对单克隆抗体而言。

鼠单抗，但是说明书里面没有验证信息，可以考虑一下义翘的myc抗体，标签的位置和偶联重组蛋白的类型都做过严格验证。

1、对细胞温和，不影响细胞功能及其分离后培养，可直接上流式纯度高，回收率高成本低此外，Mouse lineage panel中biotin标记的抗体还可用于FCM分析细胞表面抗原，以及进行细胞/组织免疫荧光实验。

2、小鼠B细胞： CD45R/B220（相应mAb为RA3- 6B2）是小鼠全B细胞最常用标记，但特异性的标记和人相同，仍为CD1小鼠T细胞：小鼠重要的T细胞标记有Thy- 1(CD90)和成熟T细胞标记CD3e。

3、再进一步克隆化，这种克隆化的杂交瘤细胞是既具有瘤的无限生长的能力，又具有产生特异性抗体的B淋巴细胞的能力，将这种克隆化的杂交瘤细胞进行培养或注入小鼠体内即可获得大量的高效价、单一的特异性抗体。

4、做流式的实验，在使用任何一个抗体之前，都需要做titration。简单的说就是找出每个抗体在你所使用的染色条件下的最佳工作浓度。抗体浓度没有优化的情况下，要么会增加阴性细胞的非特异信号，要么阳性细胞的信号变弱。

1、T细胞用CD3和CD4的抗体，CD8 T细胞用CD3和CD8的抗体，单核细胞用CD14抗体，巨噬细胞用CD68抗体，树突状细胞用CD1a、CD11c、CD83等的抗体。

2、我们可以尽量选择在说明书上有流式图形的抗体，或者选择荧光素种类最多的克隆号的抗体 2) 荧光素可以登陆，输入荧光素和检测的BD流式细胞仪机型及激发光，就可以查到相应的波长。

3、抗CD3荧光抗体。CD3为TCR成分之一，表达于T细胞。流式细胞分析时，CD3阳性细胞群即为T细胞群。抗CD19或抗CD20荧光抗体。

4、最好是把荧光素的强度和抗原表达量配对为反向。比如要检测三个抗原A， B，C， A的表达量最高，就尽量选标记了荧光强度最弱荧光素的抗体，比如Pacific Blue。而表达量最低的抗原，就选荧光强度最高的，比如APC。

流式检测，都是要使用单抗。有几个原因：单抗的特异性好，染色后的荧光强度和抗原表达水平是线性关系，不同批次间的变化较少。

抗CD3荧光抗体。CD3为TCR成分之一，表达于T细胞。流式细胞分析时，CD3阳性细胞群即为T细胞群。抗CD19或抗CD20荧光抗体。

你师姐用来做流式，是用直接标记，还是间接标记？如果是直接标记的话，那这个抗体一般不是FITC标记或者就是TRITC，PE之类的。如果恰好你的免疫组化，也是想用荧光素标记的抗体来直接标记，那就可以通用。

B细胞是一种重要的免疫细胞，主要负责产生抗体，参与人体免疫反应。在B细胞分化过程中，它们会表达不同的表面标记物和细胞因子，这些标志物和因子可以用于区分不同的B细胞亚群。

而表达量最低的抗原，就选荧光强度最高的，比如APC。选好抗体后，每个抗体都要测定最佳工作浓度。同样浓度的细胞，用不同量的抗体染色后，上机检测，计算染色指数（stain index），SI最高的那个浓度，就是最佳工作浓度。

目前常用的抗体检测方法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、放射免疫测定（RIA）、免疫荧光抗体试验、免疫印迹和流式细胞术等。其中酶联免疫吸附试验是最常用的方法之一，具有灵敏度高、操作简单、快速等优点。