哈喽！相信很多朋友都对wb如何选择抗体不太了解吧，所以小编今天就进行详细解释，还有几点拓展内容，希望能给你一定的启发，让我们现在开始吧！
WB试验之如何选择内参抗体
WB检测的基本原理不做细述，可根据以下图片脑补一下：WB实验中使用到的有三种抗体：一抗、二抗和内参抗体。
然后用水冲洗掉没染上的染液就可看到膜上的蛋白，根据目的蛋白大小选择合适的内参，剪开目的蛋白及内参条带，分别进行目的条带一抗的孵育和内参的孵育。
一抗选择 （1）确定抗体的名字，注意中英文名字、别名、亚型等信息。（2）确定您的实验类型，Elisa，WB，IHC，ICC，或者是FACS。
内参抗体，是WB实验中的重要参考，WB可以对目的蛋白进行半定量分析，判断不同样品中目的蛋白表达含量的多少，就是取决于内参的标定。内参选择在WB实验中是很关键的因素，可不是GAPDH或者β-actin万用的哦。
万能内参 主要看你的目标蛋白的分子量多大，“目标蛋白要与内参蛋白的分子量差异大！”方便检测 核蛋白，有很多种，分子量不同 膜蛋白，有很多很多种，分子量不同 浆蛋白，有成千上万种，分子量不同。
是的**，WB一定要调齐内参。通过使用内参对应的抗体检测内参，可以在检测目的产物的同时检测内参的表达，从而确保实验结果的准确性和可重复性。
小鼠wb实验,用来源于大鼠的抗体,怎么样
1、可以。小鼠的用在大鼠实验中，wb大鼠小鼠一抗可以共用，但是实验结果还是有待验证。比如剂量问题，有没有效果，甚至会不会有免疫反应，都要进行严格实验。
2、两者不能融合，不影响。大鼠为甲类抗体，小鼠为乙类抗体，抗体的种类不同，不影响。大鼠的抗体具有特异性，小鼠的抗体也具有特异性，两者不能融合。
3、肯定不行啦，必须要用*抗鼠的。因为鼠抗人的抗体本质上还是鼠的抗体，只能和人的细胞相应的表面标志物结合，而不会和鼠自身细胞上的表面标志结合的，从而流式细胞仪就检测不出来。
4、不是啊，一定要用抗小鼠的抗体，但是来源可以是其他物种，大鼠，兔，山羊等。
5、抗体-抗原有着严格的耦合性，小鼠的用在大鼠实验中，理论上是可行的，不过实验结果还是有待验证。比如剂量问题，有没有效果，甚至会不会有免疫反应，都要进行严格验证。
6、大鼠和小鼠二抗会交叉。根据查询相关公开信息显示，抗大鼠或抗小鼠二抗不得与共存的小鼠或大鼠一抗发生交叉反应。市场上的大多数二抗是多克隆抗体，没有对小鼠或大鼠免疫球蛋白进行预吸收，交叉反应难以避免。
wb实验中一抗和二抗的作用
1、WB一抗二抗是乙肝病毒感染的免疫学检测方法。WB是Western Blotting的缩写，即蛋白印迹技术，可以检测人体内是否存在抗乙肝病毒的抗体。一抗是指检测乙肝表面抗原（HBsAg）的抗体，二抗是指检测乙肝表面抗体（HBsAb）的抗体。
2、特点不同：一抗可以特异结合底物，就是识别出我们想要检测的东西。一抗和底物结合与否用肉眼是看不出来的。二抗可以和一抗结合，并带有可以被检测出的标记（如带荧光、放射性、化学发光或显色基团），作用是检测一抗。
3、这是使用二抗最基本的原因，多个二抗用来识别一抗，提高检测灵敏度。任何对一抗进行的标记或者修饰，都有可能造成一抗识别抗原能力的下降。
做wb时,一抗和二抗浓度是怎么确定的?怎么设置抗体滴度
一抗的用量和样品中的目标分子含量相关，如果含量较高，就不需要用太多一抗，以免浪费和条带太亮不易分析。
抗体的浓度，一抗浓度建议参考抗体说明书选择稀释倍数，二抗浓度建议参考底物说明书配制。
加入合适稀释度的一抗，室温孵育1-2h或4°C过夜，缓慢摇动。 15ml TBS/T洗3次(5min/T)。 加入合适稀释度的碱性磷酸酶(AP)或辣根过氧化酶(HRP)标记的二抗，室温孵育1h，缓慢摇动。 15ml TBS/T洗3次(5min/T)。
小伙伴们，上文介绍wb如何选择抗体的内容，你了解清楚吗？希望对你有所帮助，任何问题可以给我留言，让我们下期再见吧。
