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如何根据蛋白的活性部位选择相应的抗体进行免疫荧光实验
比如在免疫荧光IF的实验里,同时配合EarthOx的Dylight 549荧光二抗,使用该抗体可以准确的定位出Flag融合表达蛋白在细胞内的位置(如图红色显示部分)。
抗体选择:选择合适的抗体,确保其对目标蛋白的特异性。同时,注意验证抗体的效价和适用条件。样品固定:在对细胞或组织样品进行固定时,注意使用适当的固定方法和条件,以保持样品形态和蛋白质结构的完整性。
抗原或抗体外检测原理根据抗原抗体结合形成免疫复合物的性状与活性特点,对标本中的抗原或抗体进行定性、定位或定量的检测。
(1)种属来源。主要根据一抗种属来源而决定二抗来源,如一抗是小鼠来源,那二抗就买抗小鼠的即可(羊、兔等均可)。(2)标记物的选择。有HRP、Biotin、荧光素等标记物。
所以一-般根据抗体说明书来确定。做免疫印迹时选择抗体主要应考虑两个问题,一是所选抗体是否能识别凝胶电泳后转印至膜上的变性蛋白,另一个是所选抗体是否会引起交叉反应条带。
如何选择二抗
1、一抗选择实验类型的种属,二抗选择种属来源。一抗确定你的实验类型,Elisa,WB,IHC,ICC,还是FACS,确定实验样本的种属,Human,Mouse,还是Rat。
2、如果一抗为多克隆抗体,由于多克隆抗体主要是IgG类,因此相应的二抗应该选择抗IgG抗体。
3、二抗选择 (1)种属来源。主要根据一抗种属来源而决定二抗来源,如一抗是小鼠来源,那二抗就买抗小鼠的即可(羊、兔等均可)。(2)标记物的选择。有HRP、Biotin、荧光素等标记物。
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