免疫原及其抗体的制备注意事项

哈喽！相信很多朋友都对兔原抗体制备不太了解吧，所以小编今天就进行详细解释，还有几点拓展内容，希望能给你一定的启发，让我们现在开始吧！

兔多克隆抗体的制备流程有哪些啊?

制备抗原。选择实验动物。动物免疫。试取血进行测试，看看是否成功免疫。如果成功免疫，杀死实验动物，采集全部血清。纯化出抗体。鉴定抗体。包括纯度以及特异性。

用剪刀剪去家兔两后脚掌的部分兔毛，以酒精及碘酒消毒皮肤；第一次免疫：用2ml注射器吸取弗氏完全佐剂(FCA)乳化的抗原(人IgG)下称FCA-IgG)液1ml，每侧脚掌皮下各注入0.5ml。

多克隆抗体的制备一般包括以下几个步骤：制备抗原。选择实验动物。动物免疫。试取血进行测试，看看是否成功免疫。如果成功免疫，杀死实验动物，采集全部血清。纯化出抗体。鉴定抗体。

1、给兔子注射时加入完全和不完全佐剂的是为了增强免疫效果：改变抗原的物理状态而延长其在体内的滞留时间；使抗原缓慢释放；非特异性的促进局部吞噬细胞反应来增强动物的免疫效果。

2、兔免疫反应比较灵敏，血清量产生也有很多，淋巴结非常明显，耳静脉和动脉较粗，容易进行注射和采血，因此兔最大的用处是产生抗体，用来制备高效价和特异性强的免疫血清。

3、鼠源抗体应用中的障碍：免疫原性、半衰期短、抗体功能片段失活。

（1）多克隆抗体的制备。①免疫方法：对多克隆抗体，免疫方法一般有皮下或肌肉免疫法、皮内免疫法、淋巴结免疫法和混合法等。

通常采用杂交瘤技术来制备，杂交瘤（hybridoma）抗体技术是在细胞融合技术的基础上，将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤。

制备单克隆抗体常用的诱导剂有：化学诱导剂——聚乙二醇（PEG）、生物诱导剂——灭活的病毒（常用灭活的仙台病毒）。

初次免疫时，最好用弗氏完全佐剂，以刺激机体产生较强的免疫反应。再次免疫时，一般不用完全佐剂，而采用弗氏不完全佐剂。但在研究分枝杆菌及相关抗原时，一般不用弗氏完全佐剂，以免卡介苗的干扰。

一般都用弗氏完全佐剂是一种油包水的乳浊液，能够非常有效的诱导产生高滴度的抗体。弗氏完全佐剂含结核分枝杆菌的细胞壁成分，可以加强对抗原的抗体反应。佐剂活性来自于油滴中免疫原的持续释放，并刺激局部免疫反应。

〔2)佐剂及乳化：佐剂可以帮助抗原在注射部位缓慢释放，以增加免疫刺激的效果。佐剂有完全和不完全佐剂之分。完全佐剂加有灭活的分枝杆菌(如卡介苗)或棒状杆菌。福氏佐剂可从试剂公司购买，也可用羊毛脂和石蜡油按1：2—4混合自行制备。

实验方案根据抗原的性质不同而异。下面以制备家兔抗人IgG免疫血清为例作具体说明。

1、制备抗体的兔子，我们可能需要一个中等健康良好的兔子，体重不能过胖也不能过瘦，体重适中。

2、大型兔的体重大约在5-8公斤左右（也有少数超过8公斤），中型兔的体重大约在2-4公斤左右，小型兔的体重大约在2公斤以下。一般兔的躯体可分为头颈部、躯干部、四肢和尾等四部分。

3、制备兔源多克隆抗体的主要步骤包括：准备完全抗原。对兔子进行免疫。进行效价检测和终放。进行抗体亲和纯化。对抗体进行浓缩和保存。在免疫过程中，需要选择合适的佐剂和抗原，以产生良好的免疫反应。

4、最常用的实验动物是家兔，一般选择选择年龄在6个月以上当年繁殖的♂性，体重2 ～3公斤，健康家兔三只，免疫前用金属编号牌固定兔耳，或用染料涂沫在动物的背部，作出明确的标记。

5、多克隆抗体由于其可识别多个抗原表位、可引起沉淀反应，制备时间短，成本低的原因广泛应用于研究和诊断方面。免疫方法可以采用以下各种方法之一进行免疫。

1、兔在临床医学研究中的主要应用有药物安全性评价、心血管疾病研究等。药物安全性评价：兔是常用的药物安全性评价动物之一，可用于评价药物的毒性、耐受性和代谢动力学等方面。

2、如：（1）病原体免疫血清：如细菌、病毒、立克次氏体等免疫兔血清等。（2）间接免疫血清：如兔抗人球蛋白免疫血清、羊抗免疫血清等。（3）抗补体抗体血清：如免疫豚鼠球蛋白免疫血清等。

3、（一）发热研究及热源试验家兔对热源物质反应灵敏，常规用于制药和药检部门检查制品的热源。

4、免疫学的应用：免疫预防和免疫治疗 ①免疫预防：患病前的预防，即把疫苗接种到人体内，使人产生对传染病的抵抗能力，增强了人的免疫力。