各位访客大家好!今天小编关注到一个比较有意思的话题，就是关于活细胞流式抗体的问题，于是小编就整理了几个相关介绍的解答，让我们一起看看吧，希望对你有帮助
细胞死亡时,流式荧光抗体染细胞表面抗体是否有影响?
1、细胞死亡，到分解的这段时间，由于细胞膜的完整性不复存在，会非特异性的吸附很多抗体，导致假阳性，所以一定要把死细胞排除在外。
2、（1）确保标本上机检测前的浓度为1×106/ml，细胞浓度过低直接影响检测结果。（2）使用蛋白封闭剂，封闭非特异结合点，尤其在间接免疫荧光标记时必不可少。常用的蛋白封闭剂为0.5%牛血清白蛋白和1%胎牛血清。
3、HE染色、光镜观察：凋亡细胞呈圆形，胞核深染，胞质浓缩，染色质成团块状，细胞表面有“出芽”现象。丫啶橙（AO）染色，荧光显微镜观察：活细胞核呈黄绿色荧光，胞质呈红色荧光。
如何用流式检测细胞凋亡
流式检测细胞凋亡的原理 Annexin V和PI双染法是流式检测细胞凋亡的经典方法 ，它是基于凋亡的早期细胞膜上的磷脂酰丝氨酸（phosphotidylserine， PS）从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面这一原理来实现的（如下图3）。
流式图四个象限看凋亡：在二维散点图上，PI 和 annexin V 分别是X和Y轴。一般认为PI单染的细胞是已经死亡的细胞，annexin V 单染的细胞是凋亡早期的细胞，而双染是凋亡中期的。
Q1：(AnnexinV-FITC)-/PI+，此区域的细胞为坏死细胞。也可能有少数的晚期凋亡细胞在其中，甚至机械损伤的细胞也包含其中。Q2：(AnnexinV+FITC)+/PI+，此区域的细胞为晚期凋亡细胞。
抗体是活细胞还是细胞产物
抗体是细胞产物。抗体是浆细胞（效应B细胞）的一种分泌物，仅被发现存在于脊椎动物的血液等体液中，及其B细胞的细胞膜表面，能鉴别与中和外来物质如细菌、病毒等的大型Y形蛋白质。
血小板、花粉、酵母菌、精子都是活细胞。植物的导管、 木纤维属于死细胞。胃蛋白酶 、 甲状腺素、 抗体属于细胞产物。活细胞就是能进行新陈代谢、繁殖、复制的细胞。例如：筛管细胞，酵母菌，花粉，精子，血小板等。
细胞产物：胃蛋白酶、甲状腺素、抗体。活细胞就是能进行新陈代谢的细胞，死细胞就是不能进行新陈代谢的细胞.细胞的产物分初级代谢产物和次级代谢产物.包括代谢废物和激素，或者氧气如光合作用细胞。
细胞产物：胃蛋白酶、甲状腺素、抗体 血小板是哺乳动物血液中的成分，有凝血止血作用，属活细胞；花粉是有花植物的精细胞，是活细胞；酵母菌是真核生物，自然也是活细胞；至于精子，看看你自己的就知道了。
在植物的细胞的分化过程中，植物的木纤维主要构成植物的细胞壁和起支撑植物的作用，如果是活细胞，那么植物将消耗大量的能量来供应这些纤维细胞的新城代谢的，这是对能量的极大浪费，所以长久下来，植物的木纤维细胞就变成死细胞了。
活细胞就是能进行新陈代谢、繁殖、复制的细胞。例如血小板，筛管细胞，酵母菌，花粉，精子等。死细胞就是不能进行新陈代谢、繁殖、复制的细胞。例如植物的导管细胞、木纤维等。
荧光分选细胞时,流式抗体用什么稀释
1、PBS稀释。当然最好用封闭液直接稀释，再加一点TritonX100效果好。培养液成分太多了。而且固定之后细胞都死了，用培养液没什么意义，只要保证其pH等条件适合就好了。抗体说明书上都会有推荐的稀释倍数。
2、抗体不用水稀释，一般用PBS稀释，稀释后马上就用，尽量不要存放。如果背景有些高，可以用PBS－T稀释也行。
3、定量细胞浓度 分为2组，一组为实验组，另一组为抗体对照组 两组都先加入非特异性的IgG，封闭可能的Fc受体 按照抗体生产厂家的推荐浓度加入抗体，对照组加入同样荧光标记的非特异性同型抗体。
4、FITC 已经稀释好的可以用100次，按说明书加即可。Purified 是冻干粉，需要自己买抗体稀释液稀释，但是价格相对便宜。
5、（3－5在超净台操作）取出PMA（1∶100），BFA（1∶10）和离子霉素（1∶10），使用无菌无叠氮钠PBS稀释储存液。
6、，加入相应的荧光标记的抗体，混匀，避光，4度孵育30min。5，加入1mlPBS洗两遍（3500rpm，4度，离心）。6，用200ul PBS重悬，经纱布过滤转至流式管，上级检测。
流式检测Th17细胞需要哪些染色抗体
你需要6种抗体：CD4-标记荧光1 CD25-标记荧光2 CD127-标记荧光3 加上标记了三种对应荧光的同型非特异抗体。先用同型非特异抗体分别染色的细胞调节阴性阈值。
胞内染色：加入IFN-gamma；或IgG1的抗体20l，混匀，室温避光30分钟。加入2ml PBS，1000转，离心5分钟，弃上清。加入PBS 500l。上机前4度保存。1上机检测。
流式检测，都是要使用单抗。有几个原因：单抗的特异性好，染色后的荧光强度和抗原表达水平是线性关系，不同批次间的变化较少。
而表达量最低的抗原，就选荧光强度最高的，比如APC。选好抗体后，每个抗体都要测定最佳工作浓度。同样浓度的细胞，用不同量的抗体染色后，上机检测，计算染色指数（stain index），SI最高的那个浓度，就是最佳工作浓度。
流式细胞仪检测的是相对值，所以必须要有各种对照来设定机器的参数和阈值。这个清单比较长。就你说的这三种，我可以展开说一下。
选用和特异性抗体同种亚型的，同样荧光素标记的抗体，采用同样的染色步骤染同样浓度的细胞。然后上机检测。如果细胞有非特异性的结合，那同型对照的荧光强度可能会比未染色的阴性对照要高一些。
流式细胞仪结果图解读_流式细胞仪技术
流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或荧光。
流式细胞仪构成：流体部分，光学部分，电子部分。
流式细胞仪，就是将检测器换成了光电系统，此时，就不用人眼去观察，而用这个检测系统来进行检测。它可以分析细胞表面的一些抗原的表形，而且还可以分析细胞内的一些抗原以及抗体的表形。
(一)单参数直方图 单参数直方图是一维数据用得最多的图形显示形式，既可用于定性分析，又可用于定量分析，形同一般X-Y平面描图仪给出的曲线。根据选择放大器类型不同，横坐标可以是线性标度或对数标度。
二维点图以双参数显示结果，每个点表示一个或多个细胞。图5-6为阴性对照图，用于设定阴性对照边界，全图划分为四个象限，以区分阴性细胞、单阳性细胞以及双阳性细胞。
这种四个象限的图，一般都是看两种染色的关系（横坐标和纵坐标）。左下象限，是两种目标抗原都没有表达（染色阴性）。右上象限，是两种都有表达（双阳性）。
到此，以上就是小编对于流式细胞活性检测的问题就介绍到这了，希望介绍的几点解答对大家有用，有任何问题和不懂的，欢迎各位老师在评论区讨论，给我留言。
